一種食用油中苯并(a)芘的提取方法
【專利摘要】本發明涉及食用油中苯并(a)芘前處理技術，具體公開了一種食用油中苯并(a)芘的提取方法，包括以下步驟：1）取食用油通過正己烷飽和的乙腈進行液液萃取；2）取前一步驟獲得的萃余油液，對所述萃余油液重復萃取操作；3）合并每次萃取后的乙腈層萃取液，獲得總萃取液；4）向總萃取液中加入固體吸附劑，凈化處理后固液分離，取上清液；5）將上清液在氮氣下吹干，用乙腈重溶，過濾膜后進行液相色譜分析。本發明對苯并(a)芘的提取操作步驟簡單、經濟適用，保證回收率的同時又能充分去除雜質干擾，提高檢測靈敏度，減少檢測儀器的維護、延長使用壽命，適用于生產實際，便于快速準確檢測，具有良好的推廣價值和應用前景。
【專利說明】—種食用油中苯并(a)芘的提取方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及苯并(a)芘的前處理技術，尤其涉及一種食用油中苯并(a)芘的提取方法，屬于食品分析領域。
【背景技術】
[0002]苯并(a)芘是由5個苯環構成的多環芳烴(PAHs)化合物，是一種強致癌物質，在生產植物油的過程中可能因環境污染或原材料帶人或加工時溫度過高而產生。
[0003]目前，我國檢測植物油中苯并(a)芘的最新國標測定方法(GB/T22509-2008)中采用氧化鋁裝柱，固相層析法進行前處理，存在著操作時間長、試劑消耗大、回收率不穩定、對試劑和人員要求較高等問題，以致不能很好地用此法對植物油中苯并(a)芘殘留進行快速有效檢測。歐盟208 / 2005號文件規定食用油中BaP的最大限量2 μ g/kg,國際食品法典委員會(CAC)規定食用油脂中BaP的最大限量5 μ g/kg, GB2716-2005食用植物油衛生標準規定我國最大限量為10 μ g/kg，與國際限量有較大差異。2010年3月，我國湖南金浩茶油股份有限公司(下簡稱金浩公司)等即被查出致癌物“苯并芘”嚴重超標，我國逐漸加強對苯并芘檢測的重視，隨著人們食品安全的關注日益加強，對相關的檢測有了更加嚴格的要求。而植物油中苯并(a)芘的測定則是食品檢驗機構最常見的檢測項目之一，因此建立一種快速準確和科學可靠的植物油中苯并(a)芘含量的檢測方法具有積極意義。
[0004]影響油脂中苯并(a)芘測定的主要因素是油脂中大量的甘油三酯和脂肪伴隨物，且食用油中苯并(a)芘以痕量級存在，在萃取和純化過程中易進一步損失，影響檢測結果準確度。許多有機化合物會和苯并(a)芘一起被萃取出來，干擾進一步的分離和定量檢測。很多PAHs的結構相似，使得苯并(a)芘的分離檢測困難。目前，我國檢測食用油中苯并(a)芘的國標測定方法GB/T5009.27-2003食品中苯并(a)芘測定和GB/T22509-2008動植物油脂苯并(a)芘的測定反相高效液相色譜法兩種方法。國標測定方法GB/T5009.27-2003采用熒光分光光度法和目測比色法，受環境因素影響較大，易受到外界干擾產生誤差；國標測定方法GB/T22509-2008中高效液相-熒光檢測器法簡單快速，但方法中對凈化用的中性氧化鋁要求高，處理復雜，實際操作中的重現性和操作性不強，操作復雜。
[0005]近幾年，也不斷涌現出了其他幾種檢測食用油脂中苯并(a)芘的前處理方法，下面列舉幾個比較典型的方法:方法一水解皂化，皂化可以有效地去除油脂，用KOH或NaOH的甲醇或乙醇溶液與一定量食用油一起進行回流皂化，皂化4h后，未皂化物再用環己烷等進行液一液萃取，萃取物經濃縮后檢測；方法二凝膠滲透色譜分離。該方法基于尺寸排阻的分離原理，利用樣品中各組分分子大小不同，從而在凝膠中滯留時間不同而達到分離目的。凝膠滲透色譜對樣品進行凈化分離時大分子首先流出，需配合同位素稀釋法采用氣質檢測；方法三固相萃取，是一種基于液-固分離萃取的試樣預處理技術，用固相萃取富集凈化。將油樣溶解進行提取，加入到活化后的固相萃取柱中，富集后進行梯度洗脫，洗脫液經過濃縮后檢測。方法四液-液萃取，通過調節不同試劑的配比，改變苯并(a)芘在油脂與試劑的溶解分配比，從而將其分離，濃縮后進行檢測。[0006]對于食用油中苯并(a)芘的分析測定來說，前處理技術十分關鍵。GB/T5009.27-2003食品中苯并(a)芘測定標準中采用的熒光分光光度法檢出限不定，當試樣量不足或點樣量不足時就無法達到lng/g的檢出限；目測比色法，只能進行概略定量，且這兩種方法易受到外界干擾。GB/T22509-2008動植物油脂苯并(a)芘的測定反相高效液相色譜法標準中采用單純的氧化鋁凈化柱凈化基質，當油脂的取樣量增大時會隨著洗脫液流出，影響測定。
[0007]而對于新興的幾種檢測方法，其中水解皂化法，耗時長，皂化不完全對結果影響較大，造成靈敏度和準確度下降；凝膠滲透色譜法中，苯并(a)芘具有良好的親脂性，在洗脫過程中競爭結合導致滯留時間不明確，尺寸排阻分離效果不好，處理后殘油量多，影響檢測；固相萃取法對柱子的填料要求嚴格，對于食用油成分復雜，填料的成分不易選擇。同時通過大量的實驗表明，在用固相萃取過程中會消耗大量的有機試劑，產生大量的廢液，不易于推廣應用，且用不同的固相萃取柱洗脫后均有殘油，對苯并(a)芘檢測準確性有影響；簡單的液-液萃取容易造成油脂殘留、回收不充分等問題。現有的文獻中提到的采用乙腈飽和的正己烷進行溶解，然后采用正己烷飽和的乙腈萃取的苯并(a)芘提取方法中，首先采用乙腈飽和的正己烷溶解食用油，該步驟除脂效果一般，而且兩相經一定比例混合分離后，溶有油脂的正己烷層處于上層，不利于吸取分離，從而影響后續的液相檢測，對儀器產生污染，導致檢測靈敏度低，儀器使用壽命短。
【發明內容】
[0008]本發明針對現有技術的不足，提供一種改進的從食用油中提取苯并(a)芘的方法。本發明技術采用優化的液液萃取方法，采用正己烷飽和后的乙腈萃取，使苯并(a)芘和油脂最大程度的分離，同時采用固體吸附劑，減少雜質干擾，優化了萃取方法，滿足苯并(a)芘提取要求和液相的檢測條件，是一種快速準確和科學可靠的植物油中苯并(a)芘含量的提取方法。
[0009]本發明解決上述技術問題的技術方案如下:一種食用油中苯并(a)芘的提取方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0010]I)取一定質量的食用油進行液液萃取,萃取條件為:以正己燒飽和的乙腈作為萃取劑，渦混震蕩后冷凍離心，分離獲得乙腈層萃取液和萃余油液；
[0011]2)取前一步驟獲得的萃余油液，對所述萃余油液重復步驟I)的萃取操作；
[0012]3)合并步驟I)至2)每次萃取后的乙腈層萃取液，獲得總萃取液；
[0013]4)向前一步驟的總萃取液中加入固體吸附劑，凈化處理后固液分離，取上清液；
[0014]5)將前一步驟的上清液在氮氣下吹干，用乙腈重溶，過濾膜后進行液相色譜分析。
[0015]本發明的有益效果是:本發明方法采用正己烷飽和的乙腈萃取以及固體吸附劑凈化處理，利用高效液相色譜儀進行分析，即可完成食用油中苯并(a)芘的檢測。減少了國標方法氧化鋁柱固相萃取法的提取操作時間，試劑消耗明顯降低，固體吸附劑減少雜質干擾，保護儀器，延長使用壽命；相比皂化方法，減少皂化回流的時間，操作更加簡單；針對超聲和凝膠滲透法具有更加明顯的萃取效果，提取更加方便快速。
[0016]在上述技術方案的基礎上，本發明還可以做如下改進。
[0017]進一步，食用油與萃取劑正己烷飽和的乙腈的質量體積比為Ig: (8?10)ml。萃取液用量的選擇為現有技術，本發明出于經濟的角度選擇食用油與萃取劑的質量體積比為Ig: (8 ?10) ml,η
[0018]優選的，步驟I)中渦旋震蕩的時間為2?5min。
[0019]更優選的，步驟I)中渦旋震蕩的時間為2min。
[0020]優選的，步驟I)中冷凍離心的條件為:-20±2°C，3500?4000rpm，冷凍離心10?15min。
[0021]更優選的，步驟I)中冷凍離心的條件為:-20°C,4000rpm,冷凍離心15min。
[0022]優選的，步驟2)所述重復次數為I?3次。
[0023]進一步，步驟4)所述固體吸附劑為固體吸附劑SAX。
[0024]優選的，步驟4)所述固體吸附劑的用量為每毫升總萃取液加入固體吸附劑
0.01 ?0.03g。
[0025]優選的，步驟5)所述氮氣吹干的溫度為40?45°C。
[0026]更優選的，步驟5)所述氮氣吹干的溫度為40°C。
[0027]優選的，步驟5)所采用的過濾膜為0.45 μ m。
[0028]優選的，步驟5)所述液相色譜分析的條件為:分析色譜柱:多環芳烴分析柱；柱溫:40°C;檢測器:FLD熒光檢測器，激發波長384nm，發射波長416nm ;流動相為乙腈:水體積比為90:10 ;流動相流速:lmL/min ;進樣量:10 μ L0
[0029]所述多環芳烴分析柱的規格為:柱長250mm,內徑4.6mm,粒徑5 μ m。
[0030]本發明第二方面公開了前述提取方法在食用油中苯并(a)芘含量檢測中的應用。
[0031]采用上述進一步方案的有益效果是，本發明采用試劑正己烷飽和的乙腈萃取，使苯并(a)芘最大程度的溶解到乙腈相中，減少油脂殘留，而且用固體吸附劑SAX吸附雜質，代替氧化鋁柱，減少裝柱和活化的步驟，操作簡便易行，同時可以達到國標方法檢測限，有較好的靈敏度和準確度。
[0032]本方法通過優化改進，將萃取后的離心過程采用冷凍離心，利用油脂低溫凝固的特性，達到減少萃取液殘油，同時增加了固體吸附劑SAX，將成分復雜的色素、脂肪酸等充分吸附，可以減少對色譜柱的污染，提高檢測靈敏度的目的。
[0033]本發明方法采用正己烷飽和的乙腈萃取以及固體吸附劑凈化處理，利用高效液相色譜儀進行分析，即可完成食用油中苯并(a)芘的檢測。與目前大部分的檢測機構采用的國標GB/T22509-2008動植物油脂苯并(a)芘的測定反相高效液相色譜法標準方法相比:
[0034](I)該發明技術操作步驟簡單快速，減少氧化鋁活化、裝柱、過柱過程，操作簡單易行，實驗時間由原來的一到兩天時間減少到幾個小時即可完成，便于快速掌握檢測結果，對生產控制有重要意義。
[0035](2)國標方法耗用試劑量大，活化、沖洗過程耗費大量的有機試劑，該發明技術試劑用量少、經濟適用，同時可以減少有機試劑的危害及排放污染。
[0036](3)該方法采用冷凍離心，有效去除殘油，40°C氮吹保持苯并(a)芘特性，能夠使檢測結果穩定，采用固體吸附劑SAX又能充分去除雜質干擾，提高檢測靈敏度，減少檢測儀器的維護、延長儀器使用壽命。
[0037]綜上所述本發明對苯并(a)芘的提取操作步驟簡單、經濟適用，保證回收率的同時又能充分去除雜質干擾，提高檢測靈敏度，減少檢測儀器的維護、延長使用壽命，適用于 生產實際，便于快速準確檢測，具有良好的推廣價值和應用前景。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0038]圖1為花生油中苯并(a)芘檢測的HPLC圖譜；
[0039]圖2為玉米油中苯并(a)芘檢測的HPLC圖譜。
【具體實施方式】
[0040]以下結合附圖對本發明的原理和特征進行描述，所舉實例只用于解釋本發明，并非用于限定本發明的范圍。
[0041 ] 以上所述僅為本發明的較佳實施例，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
[0042]實施例1
[0043]準確稱取一級壓榨花生油0.5g (精確到0.0Olg)于15mL螺帽塑料離心管中，加入4mL正己燒飽和的乙腈,鏇潤震蕩5min, -18°C冷凍離心,3500rpm,離心15min,將乙腈層轉
移至另一干凈塑料管中。重復提取2次，合并乙腈層，即為萃取液。
[0044]在萃取液(IOml)中加入固體吸附劑SAX0.2g,鏇潤震蕩2min, 3000rpm,離心5min,將上層凈化液移出并于40°C氮吹至干，加ImL乙腈重溶，過0.45 μ m有機濾膜，供液相檢測，液相檢測的條件為:分析色譜柱:多環芳烴分析柱，柱長250mm,內徑4.6mm,粒徑5μηι ；柱溫:40°C ;檢測器:FLD熒光檢測器，激發波長384nm，發射波長416nm ;流動相:90%乙腈-10%水；流動相流速:lmL/min ;進樣量:10 μ L。HPLC圖譜見附圖1，檢測結果為1.5 μ g/
kg ο
[0045]實施例2
[0046]準確稱取一級玉米油0.5g (精確到0.0Olg)于15mL螺帽塑料離心管中，加入5mL正己烷飽和的乙腈，漩渦震蕩2min，-22°C冷凍離心，4000rpm，離心lOmin，將乙腈層轉移至另一干凈塑料管中。重復提取3次，合并三次提取的乙腈層，即為萃取液。
[0047]在萃取液(IOml)中加入固體吸附劑SAX0.3g,鏇潤震蕩2min,3000rpm,離心3min,將上層凈化液移出并于45°C氮吹至干，加ImL乙腈重溶，過0.45 μ m有機濾膜，供液相檢測，，液相檢測的條件為:分析色譜柱:多環芳烴分析柱，柱長250_，內徑4.6_，粒徑5μπι;柱溫:40°C ;檢測器:FLD熒光檢測器，激發波長384nm，發射波長416nm ;流動相:90%乙腈-10%水；流動相流速:lmL/min ;進樣量:10 μ L0 HPLC圖譜見附圖2，檢測結果為 0.75 μ g/kgo
【權利要求】
1.一種食用油中苯并(a)芘的提取方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)取一定質量的食用油進行液液萃取，萃取條件為:以正己燒飽和的乙腈作為萃取劑，渦混震蕩后冷凍離心，分離獲得乙腈層萃取液和萃余油液； 2)取前一步驟獲得的萃余油液，對所述萃余油液重復步驟I)的萃取操作； 3)合并步驟I)至2)每次萃取后的乙腈層萃取液，獲得總萃取液； 4)向前一步驟的總萃取液中加入固體吸附劑，凈化處理后固液分離，取上清液； 5)將前一步驟的上清液在氮氣下吹干，用乙腈重溶，過濾膜后對進行液相色譜分析。
2.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟I)所述食用油與萃取劑正己烷飽和的乙腈的質量體積比為Ig:8?10mL。
3.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟I)中冷凍離心的條件為:-20±2°C，3500 ?4000rpm，冷凍離心 10 ?15min。
4.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟2)所述重復次數為I?3次。
5.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟4)所述固體吸附劑為固體吸附劑SAX。
6.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟4)所述固體吸附劑的用量為每毫升總萃取液加入固體吸附劑0.01?0.03g。
7.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟5)所述氮氣吹干的溫度為40?45。。。
8.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟5)所采用的過濾膜為0.45 μ m。
9.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟5)所述液相色譜分析的條件為:分析色譜柱:多環芳烴分析柱；柱溫:40°C ;檢測器:FLD熒光檢測器，激發波長384nm，發射波長416nm ;流動相為乙腈:水體積比為90:10 ;流動相流速:lmL/min ;進樣量:10uL。
10.權利要求1-9任一權利要求所述提取方法在食用油中苯并(a)芘含量檢測中的應用。
【文檔編號】G01N30/02GK103869014SQ201410103856
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年3月19日 優先權日:2014年3月19日
【發明者】宮旭洲, 杜祖波, 張睿, 徐會茹, 初麗君, 王珊珊 申請人:山東魯花集團有限公司
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