利用高效液相色譜法分析安立生坦及其制劑含量的方法
【專利摘要】本發明提供了一種利用高效液相色譜法分析安立生坦及其制劑含量的方法，該高效液相色譜分析方法采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱為色譜柱，配備紫外檢測器；流動相由流動相A、流動相B組成；采用15～25mmol/L磷酸氫二鈉緩沖液(含0.01％三乙胺，用磷酸調pH至6.0～6.9)作為流動相A；采用乙腈作為流動相B，洗脫方式采用梯度洗脫。該方法能夠準確測定安立生坦及其制劑的含量，且該方法準確度高、專屬性強。
【專利說明】利用高效液相色譜法分析安立生坦及其制劑含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于藥物分析【技術領域】，涉及安立生坦及其制劑含量的分析方法，具體地， 涉及利用高效液相色譜法分析安立生坦及其制劑含量的方法。
【背景技術】
[0002] 肺動脈高壓是指各種原因引起的肺動脈壓力持久增高，為罕見的慢性綜合病癥， 表現為肺動脈縮小、破損及血壓過高。肺動脈血管壁的增厚和損傷會促使血管縮小，小的血 液凝塊會在血管中形成，最終導致血管阻塞。因為右側也肌不如左側也肌強健，更容易受 到損傷，因此血管阻力的增加會加重右側也臟的工作負荷，最終導致患者右也衰竭而死亡。 右也衰竭是所有類型肺動脈高壓患者致殘、致死的共同唯一因素，而肺動脈高壓也是右也 衰竭的最主要原因，其病因復雜，診斷、治療棘手是該治療領域長期W來發展緩慢的主要原 因。
[0003] 安立生坦（Ambrisentan)是一種新型的口服內皮素受體枯抗劑巧RA)，該藥物于 2007年6月15日獲得美國抑A批準，口服用于治療肺動脈高血壓，目前在國外已上市的為 規格Smg和IOmg片劑。安立生坦及其巧驚U含量的分析方法尚未見報道。
[0004] 因此，對安立生坦及其制劑含量的分析方法的研究仍有待加強。
【發明內容】
[0005] 本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。為此，本發明的 一個目的在于提出一種利用高效液相色譜法分析安立生坦及其制劑含量的方法，其能夠準 確測定安立生坦及其制劑含量，并且分離度高、專屬性強。
[0006] 安立生坦及其制劑含量的分析方法，其難度在于安立生坦是一個難溶于水的物 質，在其原料合成過程中中間體和產生的雜質比較多、W及制劑中易產生降解雜質，而且各 個雜質的性質與安立生坦的比較相近，難于分離。本發明的發明人對安立生坦及其制劑含 量的分析方法進行了大量研究，特別的，發明人通過實驗比較了在不同的色譜條件下，安立 生坦中的雜質與安立生坦的分離色譜圖。
[0007] 其中，色譜條件中，流動相（1) 體積分數為0.05%?0. 10%磯酸溶液（用H己 胺調抑值至3. 0?4. 0)為流動相A，W甲醇為流動相B的梯度洗脫條件，測定樣品的色譜 圖；
[0008] 色譜條件中，流動相（2) ; W 15?25mmol/L磯酸氨二軸緩沖液（含0. Ol % (質量 體積比）H己胺，用磯酸調抑至6. 0?6. 9)為流動相A，W己膳為流動相B的梯度洗脫條 件，測定樣品的色譜圖。
[0009] 本發明流動相A的組成為：在15?25mmol/L磯酸氨二軸緩沖液中，添加0. 01% 的H己胺，然后用磯酸調抑至6. 0?6. 9,即得本發明所述流動相A。
[0010] 結果；發現在流動相（1)的樣品色譜圖中，安立生坦未洗脫出，且基線不平；而在 流動相（2)的樣品色譜圖中，基線平穩，各雜質與安立生坦完全分離，峰型對稱，響應高，具 體見圖3。
[0011] 因此，本發明選擇的流動相為：W 15?25mmol/L磯酸氨二軸緩沖液（含0.01% H己胺，用磯酸調抑至6. 0?6. 9)為流動相A，W己膳為流動相B ;進行梯度洗脫。
[0012] 因而，本發明提供了一種利用高效液相色譜法分析安立生坦及其制劑含量的方 法。根據本發明的實施例，該高效液相色譜分析方法的色譜條件采用十八焼基娃焼鍵合 娃膠柱為色譜柱，配備紫外檢測器；流動相由流動相A、流動相B組成，采用濃度為15? 25mmol/L的磯酸氨二軸緩沖液（含0. Ol %H己胺，用磯酸調抑至6. 0?6. 9)作為流動相 A 及采用己膳作為流動相B ;洗脫方式采用梯度洗脫。根據本發明的實施例，本發明所述 梯度洗脫的條件，包括流動相比例、洗脫時間如下：
[0013]
【權利要求】
1. 一種利用高效液相色譜法分析安立生坦及其制劑含量的方法，其特征在于， 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱為色譜柱，配備紫外檢測器； 流動相由流動相A、流動相B組成， 采用15?25mmol/L磷酸氫二鈉緩沖液作為流動相A，其中，所述15?25mmol/L磷酸 氫二鈉緩沖液含有〇.Ol%三乙胺，并用磷酸調pH至6.O?6. 9 ; 米用乙腈作為流動相B; 洗脫方式采用梯度洗脫。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，檢測波長為263nm。
3. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜柱的柱溫為28?32攝氏度。
4. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 取安立生坦原料藥或制劑粉末，用乙腈超聲溶解，離心，配制成安立生坦濃度為 0· 5mg/ml的供試品溶液； (2) 色譜條件：采用十八烷基鍵合硅膠柱作為色譜柱，配備紫外檢測器；流動相由流動 相A、流動相B組成，采用15?25mmol/L磷酸氫二鈉緩沖液作為流動相A，其中，所述15? 25mmol/L磷酸氫二鈉緩沖液含有0. 01 %三乙胺，并用磷酸調pH至6. 0?6. 9,采用乙腈作 為流動相B，柱溫為28?32°C、流速為0. 8?I. 2ml/min、檢測波長為263nm，進行梯度洗 脫； (3) 取所述供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算， 得到樣品中安立生坦及其制劑的含量。
5. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫的條件為:
其中，柱溫為28?32攝氏度，檢測波長為263nm，流速為0. 8?1. 2毫升/分鐘，進樣 體積為20μL。
6. 根據權利要求5所述的方法，其特征在于，采用150mmX4. 6mm，5μm的Waters XTera C18柱，配備紫外檢測器，流動相由流動相A、流動相B組成，采用濃度為20mmol/L的磷酸氫 二鈉緩沖液作為流動相A，其中，所述濃度為20mmol/L的磷酸氫二鈉緩沖液含0. 01 %三乙 胺，并用磷酸調PH至6. 5,采用乙腈作為流動相B，進行梯度洗脫，所述梯度洗脫條件為：
其中，柱溫為30攝氏度，檢測波長為263nm，流速為I. O毫升/分鐘，進樣體積為20μL。
7. 根據權利要求5所述的方法，其特征在于，采用150mmX4. 6mm，5μm的Waters XTera C18柱，配備紫外檢測器，流動相由流動相A、流動相B組成，采用濃度為25mmol/L的磷酸氫 二鈉緩沖液作為流動相A，其中，所述濃度為25mmol/L的磷酸氫二鈉緩沖液含0. 01 %三乙 胺，并用磷酸調PH至6. 0,采用乙腈作為流動相B，進行梯度洗脫，所述梯度洗脫條件為：
其中，柱溫為32攝氏度，檢測波長為263nm，流速為1. 2毫升/分鐘，進樣體積為20μL。
8. 根據權利要求5所述的方法，其特征在于，采用150mmX4. 6mm，5μm的Waters XTera C18柱，配備紫外檢測器；流動相由流動相A、流動相B組成，采用濃度為15mmol/L的磷酸氫 二鈉緩沖液作為流動相A，其中，所述濃度為15mmol/L的磷酸氫二鈉緩沖液含0. 01 %三乙 胺，并用磷酸調PH至6. 9,采用乙腈作為流動相B，進行梯度洗脫，所述梯度洗脫條件為：
其中，柱溫為28攝氏度，檢測波長為263nm，流速為0.8毫升/分鐘，進樣體積為20μL。
9. 根據權利要求5所述的方法，其特征在于，采用150mmX4. 6mm，5μm的Waters XTera C18柱，配備紫外檢測器；流動相由流動相A、流動相B組成，采用濃度為20mmol/L的磷酸氫 二鈉緩沖液作為流動相A，其中，所述濃度為20mmol/L的磷酸氫二鈉緩沖液含0. 01 %三乙 胺，并用磷酸調PH至6. 5,采用乙腈作為流動相B，進行梯度洗脫，所述梯度洗脫條件為:
其中，柱溫為30攝氏度，檢測波長為263nm，流速為I.0毫升/分鐘，進樣體積為20μL。
10. 根據權利要求5所述的方法，其特征在于，采用150mmX4.6mm，5ym的Waters XTeraC18柱，配備紫外檢測器；流動相由流動相A、流動相B組成，采用濃度為20mmol/ L的磷酸氫二鈉緩沖液作為流動相A，其中，所述濃度為20mmol/L的磷酸氫二鈉緩沖液含 0. 01 %三乙胺，并用磷酸調pH至6. 5,采用乙腈作為流動相B，進行梯度洗脫，所述梯度洗脫 條件為：
其中，柱溫為30攝氏度，檢測波長為263nm，流速為I.O毫升/分鐘，進樣體積為20μL。
【文檔編號】G01N30/88GK104237432SQ201410426199
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年8月27日 優先權日:2014年8月27日
【發明者】李莉娥, 王學海, 許勇, 黃怡, 吳迪, 范昭澤, 黃璐, 黃翔, 樂洋, 楊仲文, 劉亞璇, 袁李芳, 肖強, 田華, 唐靜, 周文, 楊菁, 張毅 申請人:人福醫藥集團股份公司
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