一種植物染色體壓片觀察方法
【專利摘要】本發明公開了一種壓片法觀察植物染色體技術。該方法包括對分裂旺盛試材的前處理、染色體固定、細胞酸解、堿中合、染色、壓片觀察等步驟。供試材料取分裂旺盛部位1-2cm置于處理液中黑暗條件下進行前處理，固定液固定好前處理過的樣品后，采用高濃度的鹽酸酸解細胞壁，原生質體弱堿中合掉多余的鹽酸，染色、壓片，最后在顯微鏡下觀察染色體分裂情況。
【專利說明】一種植物染色體壓片觀察方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種染色體觀察方法，特別是涉及來源于植物試材的采用壓片技術進行染色體觀察的方法。
【背景技術】
[0002]植物分生細胞的有絲分裂，每天都有分裂高峰，此時把試材固定，經過染色和壓片，再置放在顯微鏡下觀察，可以看到大量處于有絲分裂各時期的細胞和染色體。染色體壓片法，是觀察植物染色體最常用的方法，也是研究染色體組型、染色體分帶、染色體畸變和姊妹染色單體交換的基礎。結合現代生物技術FISH可以清晰確定目的基因在染色體的位置及分布情況，是進一步深入研究的基礎?，F有的壓片方法，染色的原生質體中染色體與其它細胞器顏色差異不顯著，觀察效果不理想。為了克服該問題，本發明提供一種植物染色體壓片法觀察的新方法。
【發明內容】
[0003]本發明的目的是提供一種植物染色體壓片觀察方法。
[0004]為了實現上述目的，本發明的技術方案為:提供的觀察植物染色體技術，來自于壓片顯微鏡觀察技術，是如下技術:試材上取樣品，樣品前處理，固定，酸解，堿中合，染色，壓片，鏡檢等主要過程。
[0005]供試材料取分裂旺盛部位1-2 cm置于處理液中黑暗條件下進行前處理，固定液固定好前處理過的樣品后，采用高濃度的鹽酸酸解細胞壁，原生質體弱堿中合掉多余的鹽酸，染色、壓片，最后在顯微鏡下觀察染色體分裂情況。
[0006]通過鏡檢觀察細胞核中染色體數目、形態及特性。
[0007]對試材進行前期處理，使染色體凝縮，彼此分離，便宜觀察。
[0008]采用高濃度鹽酸酸解的方法，解離細胞壁，獲得植物細胞原生質體。
[0009]取供試材料分裂旺盛部位1-2 cm置于處理液中黑暗條件下進行前處理。
[0010]染色原生質體，使染色體與其它細胞器顏色差異顯著。
[0011]為達到良好的染色效果，酸解細胞壁后，采用弱堿與清水沖洗原生質體的方法，結合改良的染色劑配制技術，使染色效果良好，便于鏡檢。
【具體實施方式】
[0012]以下實施例中所述的方法，如無特別說明，均為常規方法。
[0013]一種植物染色體壓片的制作方法，包括如下步驟:
步驟1:前處理。
[0014]于上午8-11點，取供試材料的根、莖尖(莖尖剝去大葉)，浸于飽和的對二氯苯溶液中5-6小時(或用8-羥基喹啉、風油精、秋水仙素等，但時間長短不一，視條件和材料而定)，莖尖最好置于黑暗條件下。
[0015]步驟2:固定。
[0016]卡諾固定液固定2-24小時(卡諾固定液為95%酒精與冰醋酸酸按體積比3:1混合而成)。若長期保存，可換70%酒精，于冰箱冷藏層保存，也可直接進行壓片。
[0017]步驟3:酸解。
[0018]取出卡諾或酒精中的材料，濾紙吸干，(莖尖剝至最小使莖尖露出)，置于5N鹽酸中解離3-5分鐘，或在IN鹽酸中60°C水浴3-5分鐘(時間不定，可視材料大小、性質而定，以材料充分變軟為宜)。
[0019]步驟4:堿中合。
[0020]取出解離好的材料放入IN NaCo3水溶液中，中合5_10分鐘，蒸餾水或清水沖洗3-5次或浸泡2-3分鐘。
[0021]步驟5:染色。
[0022]取出材料濾紙洗干，取Imm根尖或剝取盡可能小的莖尖于載玻片上，滴兩滴改良的卡寶品紅染色液染色7-8分鐘，時間可視材料染色難易適當調整。
[0023]步驟6:壓片。
[0024]蓋蓋玻片，用鑷子壓材料部分，使材料分散，吸干周圍染液，以濾紙包載玻片，以套膠頭滴管膠頭的鉛筆敲擊材料，力度以載玻片不碎，材料細胞分散為宜。
[0025]實施例7:鏡檢。
[0026]顯微鏡下觀察，好的片子可用封片劑封片以長期保存。
[0027]上述改良卡寶品紅染色液可由如下方法制得:
?原液配制:
A原液:稱3g堿性品紅溶于10ml 70%酒精中 B原液:取1ml A原液加入90ml 5%的石炭酸水溶液 C原液:取B原液55ml加冰醋酸和福爾馬林(37%的甲醛)各6ml ※A、C原液可長期保存，B原液兩周內使用有效
?染色液配制:取C原液10-20ml，加45%醋酸80_90ml和山梨醇1.8g，配成10 — 20%
濃度的石炭酸品紅溶液，配后兩周著色力達最強，即可使用。
【權利要求】
1.一種植物染色體壓片的制作方法，包括如下步驟: 步驟I前處理 取供試材料的根、莖尖，浸于藥劑中處理，所述藥劑為飽和的對二氯苯、8-羥基喹啉、風油精、秋水仙素溶液中的一種，莖尖置于黑暗條件下； 步驟2固定 將前處理后的材料用卡諾固定液固定2-24小時，所述卡諾固定液為95%酒精與冰醋酸酸按體積比3:1混合而成；若長期保存，可換70%酒精，于冰箱冷藏層保存，也可直接進行壓片； 步驟3酸解 取出卡諾或酒精中的材料，濾紙吸干，置于5N鹽酸中解離3-5分鐘，或在IN鹽酸中60°C水浴3-5分鐘； 步驟4:堿中合 取出步驟3中解離好的材料放入IN NaCo3水溶液中，中合5_10分鐘，蒸餾水或清水沖洗3-5次或浸泡2-3分鐘； 步驟5:染色 取出材料濾紙洗干，取Imm根尖或剝取盡可能小的莖尖于載玻片上，滴兩滴改良的卡寶品紅染色液染色7-8分鐘； 步驟6:壓片 蓋蓋玻片，用鑷子壓材料部分，使材料分散，吸干周圍染液，以濾紙包載玻片，以套膠頭滴管膠頭的鉛筆敲擊材料，力度以載玻片不碎，材料細胞分散為宜； 步驟7:鏡檢 顯微鏡下觀察，好的片子可用封片劑封片以長期保存。
2.一種卡寶品紅染色液的配制方法，其特征在于包括如下步驟: 原液配制: A原液:稱3g堿性品紅溶于10ml 70%酒精中； B原液:取1ml A原液加入90ml 5%的石炭酸水溶液； C原液:取B原液55ml加冰醋酸和福爾馬林(37%的甲醛)各6ml 染色液配制:取C原液10-20ml，加45%醋酸80_90ml和山梨醇1.8g，配成10 — 20%濃度的石炭酸品紅溶液。
【文檔編號】G01N1/28GK104374618SQ201410555921
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年10月20日 優先權日:2014年10月20日
【發明者】何平, 李林光, 李慧峰, 王海波 申請人:山東省果樹研究所
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