用于檢測細胞活化抗原的試劑盒的制作方法
【專利摘要】一種用于檢測細胞活化抗原的試劑盒，包括盒體、盒蓋和設置在盒體內的襯墊，所述襯墊上設有小孔，裝有熒光標記各種單克隆抗體的試劑管被設置在所述小孔內。該試劑盒結構簡單、設計合理，方便攜帶、保存，不易受污染。使用該試劑盒檢測細胞活化抗原時，不涉及細胞培養，程序簡單，降低了檢測工作的強度；對實驗室條件要求不高，只要有流式細胞儀的實驗室即可開展檢測，便于技術廣泛推廣，檢測操作時間短、檢測精度高，上機操作和數據分析方法簡單，可以在第一時間得到臨床所需資料。
【專利說明】用于檢測細胞活化抗原的試劑盒
【技術領域】
[0001]本實用新型屬于免疫學【技術領域】，涉及一種用于檢測細胞活化抗原的試劑盒。
【背景技術】
[0002]細胞免疫廣義指經特異性細胞(如細胞毒T淋巴細胞)和非特異性細胞(如巨噬細胞、自然殺傷細胞)活性增強的免疫反應；狹義指T細胞介導的免疫。細胞免疫(cellularimmunity)是T細胞受到抗原刺激后，增殖、分化、轉化為致敏T細胞(也叫效應T細胞)，當相同抗原再次進入機體的細胞中時，致敏T細胞(效應T細胞)對抗原的直接殺傷作用及致敏T細胞所釋放的細胞因子的協同殺傷作用，統稱為細胞免疫。免疫細胞的活化是免疫應答產生的一種標志。靜止細胞經過抗原刺激活化后，表現出一系列的特征，如細胞膜表面活化分子的表達等。
[0003]目前可利用流式細胞術通過檢測免疫細胞活化后的特性，來分析抗原特異性免疫應答及其應答規律，并且可以追蹤特定細胞在免疫應答過程中的作用。現有的流式細胞計是一種零分辨率的儀器，它只能測量一個細胞的諸如總核酸量，總蛋白量等指標，而不能鑒別和測出某一特定部位的核酸或蛋白的多少；若采用多參數熒光標記，則由于串聯熒光染料易降解，會影響對結果的判定。
實用新型內容
[0004]為了解決上述技術問題，本實用新型的目的在于提供一種用于檢測細胞活化抗原的試劑盒，可以快速、準確地檢測細胞活化抗原。
[0005]為實現上述目的，本實用新型采取的技術方案是:一種用于檢測細胞活化抗原的試劑盒，包括盒體(I)、盒蓋(2)和設置在盒體(I)內的襯墊(3)，所述襯墊(3)上設有小孔，裝有熒光標記CDla單克隆抗體的試劑管(4)、裝有熒光標記CD3單克隆抗體的試劑管
(5)、裝有熒光標記CD4單克隆抗體的試劑管(6)、裝有熒光標記CD56單克隆抗體的試劑管
(7)、裝有熒光標記CD30單克隆抗體的試劑管(8)、裝有熒光標記CD69單克隆抗體的試劑管
(9)、裝有熒光標記CD80單克隆抗體的試劑管(10)、裝有熒光標記CD86單克隆抗體的試劑管(11)、裝有熒光標記CD166單克隆抗體的試劑管(12)、裝有熒光標記CD8單克隆抗體的試劑管(13)、裝有熒光標記CD14單克隆抗體的試劑管(14)、裝有熒光標記CD19單克隆抗體的試劑管(15)、裝有熒光標記IgGl單克隆抗體的試劑管(16)、裝有熒光標記IgG2a單克隆抗體的試劑管(17)裝有紅細胞裂解液的試劑管(18)和裝有PBS緩沖液的試劑管(19)被設置在所述小孔內。
[0006]其中，⑶Ia單克隆抗體、⑶86單克隆抗體、⑶166單克隆抗體和IgG2a單克隆抗體使用PE標記KD3單克隆抗體使用PerCP標記<D4單克隆抗體使用PE-CY7標記KD8單克隆抗體使用APC-CY7標記；CD14單克隆抗體、CD56單克隆抗體使用APC標記；CD30單克隆抗體、CD69單克隆抗體、CD80單克隆抗體和IgGl單克隆抗體使用FITC標記；CD19單克隆抗體使用BV421標記。[0007]其中，所述紅細胞裂解液和PBS緩沖液為本領域常規試劑。
[0008]其中，所述襯墊(3)上設有16個小孔，所述小孔在所述襯墊(3)上分成四排平行排列。
[0009]通過以上技術方案，本實用新型的有益效果如下:
[0010](I)本實用新型的試劑盒結構簡單、設計合理，方便攜帶、保存，不易受污染。
[0011](2)本實用新型的試劑盒在檢測細胞活化抗原時，不涉及細胞培養，程序簡單，降低了檢測工作的強度；對實驗室條件要求不高，只要有流式細胞儀的實驗室即可開展檢測，便于技術廣泛推廣，檢測操作時間短、檢測精度高，上機操作和數據分析方法簡單，可以在第一時間得到臨床所需資料。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0012]圖1為本實用新型的結構示意圖；
[0013]圖2-圖5為使用本實用新型的試劑盒檢測細胞活化抗原時所得的散點圖。
[0014]圖中，1-盒體，2-盒蓋，3-襯墊，4-裝有熒光標記⑶Ia單克隆抗體的試劑管，5_裝有熒光標記CD3單克隆抗體的試劑管，6-裝有熒光標記CD4單克隆抗體的試劑管，7-裝有熒光標記CD56單克隆抗體的試劑管，8-裝有熒光標記CD30單克隆抗體的試劑管，9-裝有熒光標記CD69單克隆抗體的試劑管，10-裝有熒光標記CD80單克隆抗體的試劑管，11-裝有熒光標記CD86單克隆抗體的試劑管，12-裝有熒光標記CD166單克隆抗體的試劑管，13-裝有熒光標記CD8單克隆抗體的試劑管，14-裝有熒光標記CD14單克隆抗體的試劑管，15-裝有熒光標記CD19單克隆抗體的試劑管，16-裝有熒光標記IgGl單克隆抗體的試劑管，17-裝有熒光標記IgG2a單克隆抗體的試劑管，18-裝有紅細胞裂解液的試劑管，19-裝有PBS緩沖液的試劑管。
【具體實施方式】
[0015]下面結合實施例對本實用新型的【具體實施方式】作進一步描述，本實用新型的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本實用新型的范圍構成任何限制。
[0016]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0017]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0018]下述實施例中使用的流式細胞儀為美國BD-CantoII (三激光8色)。
[0019]如圖1所示，本實用新型提供了一種用于檢測細胞活化抗原的試劑盒，包括盒體
1、盒蓋2和設置在盒體I內的襯墊3，所述襯墊3上設有16個小孔，所述小孔在所述襯墊3上分成四排平行排列，裝有熒光標記CDla單克隆抗體的試劑管4、裝有熒光標記CD3單克隆抗體的試劑管5、裝有熒光標記CD4單克隆抗體的試劑管6、裝有熒光標記CD56單克隆抗體的試劑管7、裝有熒光標記CD30單克隆抗體的試劑管8、裝有熒光標記CD69單克隆抗體的試劑管9、裝有熒光標記CD80單克隆抗體的試劑管10、裝有熒光標記CD86單克隆抗體的試劑管11、裝有熒光標記CD166單克隆抗體的試劑管12、裝有熒光標記CD8單克隆抗體的試劑管13、裝有熒光標記CD14單克隆抗體的試劑管14、裝有熒光標記CD19單克隆抗體的試劑管15、裝有熒光標記IgGl單克隆抗體的試劑管16、裝有熒光標記IgG2a單克隆抗體的試劑管17裝有紅細胞裂解液的試劑管18和裝有PBS緩沖液的試劑管19被設置在所述小孔內。
[0020]其中，⑶Ia單克隆抗體、⑶86單克隆抗體、⑶166單克隆抗體和IgG2a單克隆抗體使用PE標記KD3單克隆抗體使用PerCP標記<D4單克隆抗體使用PE-CY7標記KD8單克隆抗體使用APC-CY7標記；CD14單克隆抗體、CD56單克隆抗體使用APC標記；CD30單克隆抗體、CD69單克隆抗體、CD80單克隆抗體和IgGl單克隆抗體使用FITC標記；CD19單克隆抗體使用BV421標記。
[0021]其中，所述紅細胞裂解液購自美國BD公司，所述PBS緩沖液購自北京中杉金橋生物技術有限公司。
[0022]檢測步驟如下:
[0023]I)取四支流式管，分別編號為I號管、2號管、3號管和4號管，第一管分別加入 IgGl-FITC20 μ 1、IgG2a-PE20 μ I 的同型對照；第 二管分別加入 CD30-FITC20 μ 1、CDla-PE20 μ 1、CD3-PerCP20 μ 1、CD4-PE-CY75 μ 1、CD8-APC-CY75 μ 1、CD56-APC5 μ 1、CD19-BV4215 μ I ;第三管分別加入 CD80-FITC20 μ 1、CD86-PE20 μ 1、CD3_PerCP20 μ 1、CD4-PE-CY75 μ 1、CD8-APC-CY75 μ 1、CD14-APC5 μ 1、CD19-BV4215 μ I ;第四管分別加入CD69-FITC20y 1、CD166_PE20y 1、CD3_PerCP20 μ 1、CD4-PE-CY75 μ 1、CD8-APC-CY75 μ 1、CD14-APC5y 1、CD19-BV4215μ I ；
[0024]2)對待檢測的外周血采集物或骨髓標本進行白細胞計數，將細胞濃度調至3XlOVml,向每個管內分別加入待檢測的外周血采集物或骨髓標本70μ 1，低速渦旋混勻，2 °C至8 °C避光孵育20分鐘；
[0025]3)向每個管內分別加入紅細胞裂解液1ml，低速渦旋混勻，在2°C至8°C避光裂解紅細胞10分鐘；
[0026]4)裂解結束后立即以1500轉/分鐘離心5分鐘，離心結束后棄上清，然后向各管內加入Iml PBS，低速渦旋混勻，以1500轉/分鐘離心5分鐘；離心結束后棄上清，向各管內加入0.5ml PBS重懸，低速渦旋混勻，24h內使用流式細胞儀上機檢測；
[0027]5)在檢測時，調節好個通道電壓，收集PI門內細胞10萬，應用BDFACSDive軟件分析數據。
[0028]檢測結果如下:
[0029]數據以散點圖形式顯示，如圖2-圖5，分別用CD3+CD4+、CD3+CD8+、SSC-CD14+、SSC-CD19+、SSC-CD56+射門圈定相應的細胞群，再分別看 CD la、CD30、CD80、CD86、CD69、⑶166在以上各群細胞上的表達情況，陽性表達以陰性對照作為參考。
[0030]上面已經舉例說明了本實用新型的實施例，本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本實用新型的精神和范圍下可以對本實用新型技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本實用新型的保護范圍內。
【權利要求】
1.一種用于檢測細胞活化抗原的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒包括盒體(I)、盒蓋(2)和設置在盒體(I)內的襯墊(3)，所述襯墊(3)上設有小孔，裝有熒光標記⑶Ia單克隆抗體的試劑管(4)、裝有熒光標記CD3單克隆抗體的試劑管(5)、裝有熒光標記CD4單克隆抗體的試劑管(6)、裝有熒光標記CD56單克隆抗體的試劑管(7)、裝有熒光標記CD30單克隆抗體的試劑管(8)、裝有熒光標記CD69單克隆抗體的試劑管(9)、裝有熒光標記CD80單克隆抗體的試劑管(10)、裝有熒光標記CD86單克隆抗體的試劑管(11)、裝有熒光標記CD 166單克隆抗體的試劑管(12)、裝有熒光標記CD8單克隆抗體的試劑管(13)、裝有熒光標記CD14單克隆抗體的試劑管(14)、裝有熒光標記CD19單克隆抗體的試劑管(15)、裝有熒光標記IgGl單克隆抗體的試劑管(16)、裝有熒光標記IgG2a單克隆抗體的試劑管(17)裝有紅細胞裂解液的試劑管(18)和裝有PBS緩沖液的試劑管(19)被設置在所述小孔內。
2.按照權利要求1所述的試劑盒，其特征在于=CDla單克隆抗體、CD86單克隆抗體、CD 166單克隆抗體和IgG2a單克隆抗體使用PE標記；CD3單克隆抗體使用PerCP標記；CD4單克隆抗體使用PE-CY7標記KD8單克隆抗體使用APC-CY7標記<D14單克隆抗體、⑶56單克隆抗體使用APC標記；CD30單克隆抗體、CD69單克隆抗體、CD80單克隆抗體和IgGl單克隆抗體使用FITC標記KD19單克隆抗體使用BV421標記。
3.按照權利要求1所述的試劑盒，其特征在于:所述襯墊(3)上設有16個小孔，所述小孔在所述襯墊(3)上分成四排平行排列。
【文檔編號】G01N33/577GK203616316SQ201320688939
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2013年11月4日 優先權日:2013年11月4日
【發明者】秦曉明, 王顯鳳, 劉麗媛, 王緒華, 梁超, 方國偉, 黃士昂, 陳忠 申請人:北京海思特臨床檢驗所有限公司
專業數控銑床產品供應商
20年生產經驗，實力工廠，精工品質，質量有保障
