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專利名稱：一種石蠟組織芯片制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種石蠟組織芯片制作方法，用于制備組織芯片，屬于組織芯片技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
組織芯片技術(shù)是基因芯片技術(shù)的發(fā)展和延伸，與細(xì)胞芯片、蛋白芯片、抗體芯片一樣， 屬于一種特殊生物芯片技術(shù)。組織芯片技術(shù)可以將數(shù)十個甚至上千個不同個體的臨床組織 標(biāo)本按預(yù)先設(shè)計的順序排列在一張玻片進行分析研究，是一種高通量、多樣本的分析工具。 組織芯片技術(shù)使科研人員能同時對幾百甚至上千種組織樣本同時進行分析，進行某一個或 多個特定的基因，或與其相關(guān)的表達(dá)產(chǎn)物的研究。該技術(shù)可以與DNA、 RNA、蛋白質(zhì)、抗體 等技術(shù)相結(jié)合，與傳統(tǒng)的病理學(xué)技術(shù)、組織化學(xué)及免疫組化技術(shù)相結(jié)合，在基因、基因轉(zhuǎn) 錄和相關(guān)表達(dá)產(chǎn)物生物學(xué)功能三個水平上進行研究。這對人類基因組學(xué)的研究與發(fā)展，尤 其對基因和蛋白質(zhì)與疾病關(guān)系的研究，疾病相關(guān)基因的驗證、新藥物的開發(fā)與篩選、疾病 的分子診斷，治療過程的追蹤和預(yù)后等方面具有實際意義和廣闊的市場前景。
目前，美國Clontech和Stratagene等少數(shù)生物技術(shù)公司已開展了人及動物的組織芯 片產(chǎn)品開發(fā)和銷售，但數(shù)量少、價格高、品種單一，滿足不了醫(yī)學(xué)科研和醫(yī)藥工業(yè)研發(fā)的 需要。2001年4月，美國Lifespan生物科學(xué)公司建立了正常和疾病組織基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫。 美國Tissuelnformactics公司用動物組織芯片技術(shù)進行藥物毒理篩選和尋找新藥物作用 位點。此外，日本、英國等國正積極籌建國家臨床組織病理數(shù)據(jù)庫。
中國在組織芯片技術(shù)方面的研究進展迅速。2001年10月，中國國家科技部將組織芯 片技術(shù)列為"十五"國家科技攻關(guān)西部開發(fā)重大項目，并已在西安正式立項。該立項分成 7個子項目，包括組織芯片技術(shù)、組織芯片生物信息數(shù)據(jù)庫、自動化組織芯片儀、自動分 析裝置、組織芯片相關(guān)技術(shù)與試劑、組織芯片實際應(yīng)用技術(shù)，為中國與世界相關(guān)技術(shù)同步 發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。
目前，組織芯片的制備主要依靠機械化芯片制備儀來完成。制備儀包括操作平臺、特 殊的打孔采樣裝置和一個定位系統(tǒng)。打孔采樣裝置對供體組織蠟塊進行采樣，同時也可對 受體蠟塊進行打孔，其孔徑與采樣直徑相同，兩者均可精確定位。制備儀的定位裝置可使 穿刺針或受體蠟塊線性移動，從而制備出孔徑、孔距、孔深完全相同的組織微陣列蠟塊。 通過切片輔助系統(tǒng)將其轉(zhuǎn)移并固定到硅化和膠化玻片上即成為組織芯片。根據(jù)樣本直徑
3(0. 2 2. 0腿)不同，在一張45 mmX25 mm的玻片上可以排列40 2000個以上的組織 標(biāo)本。一般按照樣本數(shù)目的多少，將組織芯片分為低密度芯片(< 200點)、中密度芯片(200 600點)和高密度芯片(〉600點)。常用組織芯片含有組織標(biāo)本的數(shù)目在50 800個之間。 根據(jù)研究目的不同，芯片種類可以分成腫瘤組織芯片、正常組織芯片、單一或復(fù)合、特定 病理類型等數(shù)10種組織芯片。
但目前依據(jù)上述方法制備組織芯片有以下不足第一，現(xiàn)有組織芯片制作成本很高。 除特殊的儀器設(shè)備外(數(shù)十萬元)，制作1個組織芯片的費用在萬元以上，每張切片單價 在50 100元；第二，僅能在已有的蠟塊上取樣，組織來源受到限制；第三，根據(jù)現(xiàn)有設(shè)
備和方法制備的芯片，切片量僅約50張，因為是在原有蠟塊上點孔取樣，組織厚度有限； 第四，高密度芯片雖然通量大，但由于每枚組織微小，難以提供組織結(jié)構(gòu)的信息；第五，
僅在大型研究單位，才有經(jīng)費和條件進行組織芯片的相關(guān)研究，難以推廣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是開發(fā)一種簡易組織芯片制作方法，制備低密度和中密度芯片，兼顧樣 本通量、組織結(jié)構(gòu)和芯片產(chǎn)量等多方面的要求，使組織芯片技術(shù)的作用得到充分發(fā)揮。 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種石蠟組織芯片制作方法，其特征在
于，具體步驟為
第一步將所需要的組織編號后浸石蠟，或在已有的蠟塊上標(biāo)記所需要的組織后編號； 將組織切成所需大小，放在燙臺上，在60-65'C將其上的石蠟融化得到待包埋的組織； 第二步另取石蠟放入石蠟壺，用電爐加熱至60-7(TC使石蠟融化；
第三步將方形的蠟?zāi)７旁诓ＡО迳希瑢⒌谝徊降玫降拇竦慕M織在第二步中融化 的石蠟中浸沒后排列在蠟?zāi)?nèi)部的一側(cè)，在定位板或定位紙上記錄相應(yīng)位置的組織的編 號，在蠟?zāi)?nèi)部的另外一側(cè)留下方形空位，融化的石蠟沿空位處倒入蠟?zāi)?nèi)，直至將組織
浸沒，在18-25。C (或室溫下)靜置10-30min使石蠟聚合，撤除蠟?zāi)＃仄叫杏诓ＡО宸?向切片。
進一步地，所述第一步中切后的組織為方體狀或圓柱體狀。 所述的方體狀的長為5ram 10ram、寬為lram 2mm、厚為lmm 2mm。 所述第三步中的蠟?zāi)Ｓ?個垂直彎折的銅條組成，長為70mra，寬為40mra，高為20mra， 厚為10 20mm。
所述第三步中留下的方形空位的長為20mm，寬為25mm。
本發(fā)明利用石蠟易溶解、易聚合的特性，使需要的組織按照一定的順序排列，先用少量石蠟將組織疏松地黏附在一起，最后用石蠟將組織完全聚合，切片后便得到所需要的組 織芯片。
本發(fā)明具有廉價、方便、快速、產(chǎn)量高、取材多樣的優(yōu)點，能普及至每一個病理科及 相關(guān)研究單位。制作的組織芯片，組織形狀不受限制，可為長條形，長方形，方形，圓柱 形，圓筒形或不規(guī)則形；組織大小可根據(jù)需要而定，在50醒X25國的面積上可排列20 300個組織，能滿足研究需要。組織芯片的高度也可根據(jù)需要而定，在5mm 20咖高的組 織芯片上可切制500張 2000張切片，遠(yuǎn)高于現(xiàn)有組織芯片切制50張切片的產(chǎn)量，約為 10 40倍；成本遠(yuǎn)低于現(xiàn)有制作方法。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例來具體說明本發(fā)明。
實施例1
采用如下方法制作石蠟組織芯片
第一步病理取材時留取所需的組織，編號，切成2ramX2mmX10mm大小，隨同病理 科常規(guī)組織處理程序，至浸石蠟的步驟；放在燙臺上，在6(TC將其上的石蠟融化得到待包 埋的組織；
第二步另取石蠟放入石蠟壺，用電爐加熱至6(TC使石蠟融化； 第三步將2個垂直彎折的銅條放在厚玻璃板上，拼成長為70mm，寬為40mm，高為 20mm，厚為lOmra的方形蠟?zāi)７旁诓ＡО迳希駷?銅條的高度)，用鑷子鉗取需要包埋的 第一枚組織，在融化的石蠟中快速浸沒一次，將平整面貼著玻璃，依靠石蠟的粘性將組織 立于玻璃上，第一塊組織有兩個側(cè)面緊貼蠟?zāi)＃酌婢o貼玻璃，在定位板或定位紙上記錄 該組織的原始編號；依次放入第二塊組織，第二塊組織底面緊貼玻璃，有一個側(cè)面與第一 枚組織相連，有一個側(cè)面與蠟?zāi)Ｏ噙B，兩枚組織之間的距離相當(dāng)與兩層蠟?zāi)５木嚯x，直至 第一排組織點位完成，長度50rnm。接著開始第二排、第三排等的點位，直至蠟?zāi)挾冗_(dá) 25mm，蠟?zāi)?nèi)有20mmx25mm的空位，將石蠟壺內(nèi)融化的石蠟沿空位處緩慢倒入蠟?zāi)?nèi)，直 至浸沒完全；在25'C靜置10min使石蠟聚合，撤除蠟?zāi)＃駈個組織的蠟塊即制備完成， 沿平行于玻璃板方向切片。
實施例2
采用如下方法制作石蠟組織芯片
第一步在蠟塊上將所需要的組織編號，定位，將組織切成長為5mm、寬為lmm、厚 為lmm的方形塊；放在燙臺上，在65'C將其上的石蠟融化得到待包埋的組織；
5第二步另取石蠟放入石蠟壺，用電爐加熱至7(TC使石蠟融化；
第三步將2個垂直彎折的銅條放在厚玻璃板上，拼成長為70mm，寬為40mm，高為 20mm，厚為20mm的方形蠟?zāi)７旁诓ＡО迳希駷?銅條的高度)，用鑷子鉗取需要包埋的 第一枚組織，在融化的石蠟中快速浸沒一次，將平整面貼著玻璃，依靠石蠟的粘性將組織 立于玻璃上，第一塊組織有兩個側(cè)面緊貼蠟?zāi)＃酌婢o貼玻璃，在定位板或定位紙上記錄 該組織的原始編號；依次放入第二塊組織，第二塊組織底面緊貼玻璃，有一個側(cè)面與第一 枚組織相連，有一個側(cè)面與蠟?zāi)Ｏ噙B，兩枚組織之間的距離相當(dāng)與兩層蠟?zāi)５木嚯x，直至 第一排組織點位完成，長度50mrn。接著開始第二排、第三排等的點位，直至蠟?zāi)挾冗_(dá) 25mm，蠟?zāi)?nèi)有20mmx25mm的空位，將石蠟壺內(nèi)融化的石蠟沿空位處緩慢倒入蠟?zāi)?nèi)，直 至浸沒完全；在25'C靜置10min使石蠟聚合，撤除蠟?zāi)＃駈個組織的蠟塊即制備完成， 沿平行于玻璃板方向切片。
實施例3
采用如下方法制作石蠟組織芯片
第一步在蠟塊上將所需要的組織編號，定位，將組織切成長10mm,半徑為lmin大 小的圓柱體；放在燙臺上，在65T:將其上的石蠟融化得到待包埋的組織； 第二步另取石蠟放入石蠟壺，用電爐加熱至7(TC使石蠟融化； 第三步將2個垂直彎折的銅條放在厚玻璃板上，拼成長為70mm，寬為40mm，高為 20mm，厚為20mm的方形蠟?zāi)７旁诓ＡО迳希駷?銅條的高度)，用鑷子鉗取需要包埋的 第一枚組織，在融化的石蠟中快速浸沒一次，將平整面貼著玻璃，依靠石蠟的粘性將組織 立于玻璃上，第一塊組織兩側(cè)緊貼蠟?zāi)＃酌婢o貼玻璃，在定位板或定位紙上記錄該組織 的原始編號；依次放入第二塊組織，第二塊組織底面緊貼玻璃， 一側(cè)與第一枚組織相連， 另一側(cè)與蠟?zāi)Ｏ噙B，兩枚組織之間的距離相當(dāng)與兩層蠟?zāi)５木嚯x，直至第一排組織點位完 成，長度50mm。接著開始第二排、第三排等的點位，直至蠟?zāi)挾冗_(dá)25咖，蠟?zāi)?nèi)有 20mmx25mm的空位，將石蠟壺內(nèi)融化的石蠟沿空位處緩慢倒入蠟?zāi)?nèi)，直至浸沒完全；在 18T:靜置30min待石蠟聚合后，撤除蠟?zāi)＃駈個組織的蠟塊即制備完成，沿平行于玻 璃板方向切片。
權(quán)利要求
1、一種石蠟組織芯片制作方法，其特征在于，具體步驟為第一步將所需要的組織編號后浸石蠟，或在已有的蠟塊上標(biāo)記所需要的組織后編號；將組織切成所需大小，放在燙臺上，在60-65℃將其上的石蠟融化得到待包埋的組織；第二步另取石蠟放入石蠟壺，用電爐加熱至60-70℃使石蠟融化；第三步將方形的蠟?zāi)７旁诓ＡО迳希瑢⒌谝徊降玫降拇竦慕M織在第二步中融化的石蠟中浸沒后排列在蠟?zāi)?nèi)部的一側(cè)，在定位板或定位紙上記錄相應(yīng)位置的組織的編號，在蠟?zāi)?nèi)部的另外一側(cè)留下方形空位，融化的石蠟沿空位處倒入蠟?zāi)?nèi)，直至將組織浸沒，在18-25℃靜置10-30min使石蠟聚合，撤除蠟?zāi)＃仄叫杏诓ＡО宸较蚯衅?br> 2、 如權(quán)利要求1所述的一種石蠟組織芯片制作方法，其特征在于，所述第一步中切 后的組織為方體狀或圓柱體狀。
3、 如權(quán)利要求2所述的一種石蠟組織芯片制作方法，其特征在于，所述的方體狀的 長為5mm 10腿、寬為lmm 2mm、 厚為l面 2mm。
4、 如權(quán)利要求1所述的一種石蠟組織芯片制作方法，其特征在于，所述第三步中的 蠟?zāi)Ｓ?個垂直彎折的銅條組成，長為70mm，寬為40mm，高為20mm，厚為10 20rnm。
5、 如權(quán)利要求2所述的一種石蠟組織芯片制作方法，其特征在于，所述第三步中留 下的方形空位的長為20mm，寬為25mm。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種石蠟組織芯片制作方法，其特征在于，具體步驟為將所需要的組織編號后浸蠟，或在已有的蠟塊上標(biāo)記所需要的組織后編號；將組織切成所需大小，放在燙臺上，在60-65℃將其上的石蠟融化得到待包埋的組織；另取石蠟放入石蠟壺，用電爐加熱使石蠟融化；將方形蠟?zāi)７旁诓ＡО迳希瑢⒌谝徊降玫降拇竦慕M織在融化的石蠟中浸沒后排列在蠟?zāi)?nèi)部的一側(cè)，在定位板或定位紙上記錄相應(yīng)位置的組織的編號，在蠟?zāi)?nèi)部的另外一側(cè)留下方形空位，融化的石蠟沿空位處倒入蠟?zāi)?nèi)，直至將組織浸沒，使石蠟聚合，撤除蠟?zāi)＃仄叫杏诓ＡО宸较蚯衅１景l(fā)明具有廉價、方便、快速、產(chǎn)量高、取材多樣的優(yōu)點，能普及至每一個病理科及相關(guān)研究單位。
文檔編號G01N1/28GK101556224SQ200910051399
公開日2009年10月14日 申請日期2009年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月18日
發(fā)明者侯英勇, 宿杰·阿克蘇, 曾海英, 譚云山 申請人:復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院