一種中藥山藥及含山藥制劑中尿囊素含量的測定方法
【專利摘要】本發明提供一種中藥山藥及含山藥制劑中尿囊素含量的測定方法，涉及中藥材及制劑的含量測定方法【技術領域】，該含量測定方法包括：包括取山藥0.5g或取含山藥制劑(以山藥計)0.5g，作為試品，向試品中加入30％乙醇水溶液50ml處理至少10分鐘，濾過，得到供試品溶液；稱取尿囊素對照品，加水溶解并稀釋制成濃度為0.05mg/ml，即得；采用HPLC進行測定，吸取對照品溶液和供試品溶液注入HPLC進行測定，按照外標方法進行計算，即得尿囊素的含量。本發明提供的中藥山藥及含山藥制劑中尿囊素含量的測定方法，該方法能夠更為科學的簡便的控制中藥山藥及各種制劑的產品質量，該方法用來測定山藥及含山藥制劑中尿囊素的含量，彌補了現有技術的不足。
【專利說明】一種中藥山藥及含山藥制劑中尿囊素含量的測定方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥材及制劑的含量測定方法【技術領域】，尤其涉及一種中藥山藥及含山藥制劑中尿囊素含量的測定方法。
【背景技術】
[0002]目前文獻報道檢測尿囊素含量的高效液相色譜法很多。用高效液相色譜法測定尿囊素的含量，特別是中藥材或中成藥中尿囊素的含量，其最大的難處在于出峰時間靠前，分離不好。
[0003]鄭琴、胡鵬翼等人在2013年6月第25卷第3期〈〈江西中醫學院報 >> 中曾發表過=HPLC法測定不同產地山藥飲片中尿囊素和腺苷的含量(簡稱文獻1)，采用高效液相色譜(HPLC)法測定健腦補腎丸中綠原酸含量的方法，具體色譜條件如下:
[0004]色譜柱:C18柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m);流動相:甲醇-水(80: 20);流速 1.0ml/min，柱溫30°C，檢測波長224nm。
[0005]結果尿囊素的出峰時間為4.8分鐘左右。
[0006]刁全平、侯冬巖等人在2013年4月第15卷第2期〈〈鞍山師范學院學報 >> 中曾發表過:HPLC法測定玉米須中尿囊素的含量(簡稱文獻2)，具體色譜條件如下:
[0007]色譜柱:C18柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m);流動相:甲醇-水(10: 90);流速0.51111/min,柱溫為室溫,檢測波長224nm。
[0008]結果尿囊素的出峰時間也為4.8分鐘左右。
[0009]反相色譜法，從原理上來說，有機相(如甲醇)比例越高，各種物質出峰越靠前。然文獻I與文獻2，兩種流動相比例相差甚遠，且流速相差一倍，其尿囊素的出峰時間確基本—致。
[0010]李厚洋、蔡其輝等人在2013年9月第11卷第27期〈〈中國醫藥指南 >> 中曾發表過:HPLC法測定縮泉膠囊中尿囊素的含量(簡稱文獻3)，具體色譜條件如下:
[0011]色譜柱:C18柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m);流動相:乙腈-0.01mol/L 磷酸 二氫鉀(10: 90);流速l.0ml/min，柱溫為室溫，檢測波長224nm。
[0012]結果尿囊素的出峰時間為9.5分鐘左右。
[0013]回瑞華、刁全平等人在2012年12月第14卷第6期〈〈鞍山師范學院學報 >> 中曾發表過:小麥中尿囊素的高效液相色譜-串聯質譜法分(簡稱文獻4)，具體色譜條件如下:
[0014]色譜柱:C18柱(2.1mmX 250mm, 1.8 μ m)；流動相:乙腈-磷酸鹽緩沖溶液(30: 70);流速 1.5ml/min，柱溫 40°C。
[0015]結果尿囊素的出峰時間約為11分鐘左右。
[0016]本領域技術人員公知:用于含量測定的色譜峰如果出峰時間過早，勢必會造成其與溶劑峰重合從而無法準確量取色譜峰的峰面積，直接導致含量測定結果不準確。
[0017]文獻4能給本領域技術人員提供一些參考價值，文獻作者采用了特殊柱子，色譜柱內徑由4.6mm改為2.1mm,充填粒徑由5 μ m改為L 8 μ m,大大延長了尿囊素的出峰時間，且文獻作者考慮到了分離的不容易，采用了質譜檢測方法，去除了其他峰的干擾。
[0018]然這樣的實驗設備配置，不是一般的試驗單位能夠作到。藥品生產企業更難做到。
[0019]目前在國家大力倡導提高中藥制劑質量，控制有效的檢測成分，提高中藥藥材質量和控制質量的藥材檢測標準的現實條件下，作為國家控制藥品質量的最后屏障的國家藥品標準，中國藥典中至今也沒有山藥的含量測定方法，這也反應了目前山藥中含量測定方法至今也無法解決的現實難題。
[0020]因此，本領域技術人員迫切地希望開發出能夠準確的測定中藥山藥及含山藥制劑含量的測定方法，以便于更為科學的簡便的控制中藥山藥及各種制劑的產品質量。
【發明內容】
[0021]本發明所要解決的技術問題在于克服現有技術的缺陷，進一步提出一種中藥山藥及含山藥制劑中尿囊素含量的測定方法。
[0022]本發明所要解決的技術問題采用以下技術方案來實現。
[0023]一種中藥山藥及含山藥制劑中尿囊素含量的測定方法，其特征在于:該含量測定方法包括:
[0024](I)供試品的前處理，包括取山藥0.5g或取含山藥制劑(以山藥計)0.5g，作為試品，向試品中加入30%乙醇水溶液50ml處理至少10分鐘，濾過，得到供試品溶液；
[0025](2)對照品溶液的制備，稱取尿囊素對照品，加水溶解并稀釋制成濃度為0.05mg/ml,即得；
[0026](3)采用HPLC進行測定，該HPLC的色譜條件包括，流動相為甲醇的水溶液；色譜柱為:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱與苯基硅烷鍵合硅膠柱串連而成；檢測波長為224nm ；
[0027](4)吸取對照品溶液和供試品溶液注入HPLC進行測定，按照外標方法進行計算，即得尿囊素的含量。
[0028]所述流動相為甲醇的水溶液，濃度為5% -20%甲醇。
[0029]步驟(3)色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱與苯基硅烷鍵合硅膠柱串連而成，順序依次為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱、苯基硅烷鍵合硅膠柱。
[0030]其最大的特點是把十八烷基硅烷鍵合硅膠柱與苯基硅烷鍵合硅膠柱串連使用。在檢測過程中達到了純化，使色譜峰達到最大限度的分離。試驗中采用了低濃度的甲醇作為流動相，在通過十八烷基硅烷鍵合硅膠柱時，極性較小成分由于吸附力強，出峰時間相當長，甚至強保留，而極性比較大的成分與尿囊素一起進入苯基硅烷鍵合硅膠柱，進行了二次分離，結果保留時間明顯延長，且分離良好。
[0031]本發明以尿囊素做為含量測定指標，而如何對尿囊素進行含量測定方法的文獻報導很多，都是關于流動相如何選擇的文章；對于尿囊素這種成分，其難點不在流動相的選擇，因為就算選擇純水作為流動相，尿囊素保留時間依然在5分鐘左右。
[0032]試驗中發明人選用C18柱(250 X 4.6_，5 μ m)串連苯基柱(250 X 4.6_，5 μ m)；流動相采用甲醇-水10: 90(體積比)；檢測波長為:224nm，獲得很好的測試結果。
[0033]在前處理方面，為了能得到更好的分離，本發明的篩選實驗的過程中也考慮了凈化處理,如:
[0034]尿囊素在水中的溶解度較好，易溶。但直接提取后，按常規法無法進樣測定，雜質多，容易損壞柱子，另外雜質多也干擾測定。因此選用中性氧化鋁柱純化(中性氧化鋁柱對酸物質有一定的吸附作用)，用50%乙醇洗脫。
[0035]精密稱取供試品適量，精密加入水50ml，稱重，回流30分鐘，放冷，稱重，用水補足損失的量，過濾，精密量取25ml，過中性氧化鋁柱(內徑lcm，5g，100-200目，濕法裝柱)，先用水30ml洗脫，棄去洗脫液，然后用50%乙醇50ml洗脫，收集洗脫液備用；接著用80%乙醇50ml洗脫，收集洗脫液備用；最后用乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，備用。
[0036]取上述各備用液，進樣分析得:50%乙醇中含有尿囊素最多。發明人在原來提取的基礎上，把洗脫液用量加大，洗脫后用水浴加熱濃縮，然后再定容到25ml量瓶中，搖勻，進樣，發現尿囊素的峰形發生變化，即長時間加熱濃縮會使其結構發生變化。
[0037]在本發明的優選實施例中，提供了一種中藥山藥的含量測定方法，其為測定該山藥中的尿囊素的含量，該含量測定方法包括:
[0038]供試品溶液的制備:取山藥細粉適量，精密稱取約0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇溶液50ml，稱重，超聲處理30分鐘，放冷，稱重,用水補足損失的量,搖勻，濾過，即得；
[0039]對照品溶液的制備:精密稱取尿囊素對照品適量置25ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，制成濃度約為0.05mg/ml的溶液，即得；
[0040]測定:分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，注入高效液相色譜儀測定，按照中國藥典2010版中規定的外標方法進行計算即得尿囊素的含量。
[0041]附:參麥顆粒中尿囊素的含量測定。
[0042]本發明的有益效果為:
[0043]本發明提供的中藥山藥及含山藥制劑中尿囊素含量的測定方法，該方法能夠更為科學的簡便的控制中藥山藥及各種制劑的產品質量，該方法用來測定山藥及含山藥制劑中尿囊素的含量，彌補了現有技術的不足。
【具體實施方式】
[0044]為了使本發明實現的技術手段、創作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。
[0045]實施例1
[0046]參麥顆粒的組成和配比:
[0047]紅參2份、南沙參27份、麥冬45份、黃精27份、山藥34份、枸杞子14份。
[0048]顆粒劑的制備方法:
[0049]以上六味，紅參切成薄片，加6倍量乙醇加熱回流提取2次，濾過，濾液回收乙醇，藥渣和其余麥冬等五味加8倍量水煎煮兩次，每次2小時(第一次考慮吸水因素加入9.5倍量水，先浸泡2小時)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至1.08?1.10(50°C )，加等量乙醇，攪勻，靜置，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.35(80?85°C )的清膏，加入上述紅參提取液和蔗糖920克，混勻，制成顆粒，干燥，約制成1000克，既得。
[0050]含量測定方法:
[0051](I)供試品溶液的制備:取參麥顆粒的內容物適量，研細，精密稱取約15g，置具塞錐形瓶中，精密加入30 %乙醇50ml，稱重，超聲處理30分鐘，放冷，稱重，用該30 %乙醇補足損失的量，搖勻，濾過，即得；
[0052](2)制備對照品溶液，稱取尿囊素作為對照品，置25ml量瓶中，加水溶解并稀釋，制成約為0.05mg/ml的溶液，即得；
[0053](3)采用HPLC對供試品溶液和對照品溶液進行測定，該HPLC的流動相為10 %甲醇溶液；檢測波長為224nm ;色譜柱為:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱與苯基硅烷鍵合硅膠柱串連而成；
[0054](3)測定:分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，注入高效液相色譜儀測定，按照中國藥典2010版中規定的外標方法進行計算即得尿囊素的含量。
[0055]以上顯示和描述了本發明的基本原理、主要特征以及本發明的優點。本行業的技術人員應該了解，本發明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發明的原理，在不脫離本發明精神和范圍的前提下，本發明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發明范圍內。本發明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效物界定。
【權利要求】
1.一種中藥山藥及含山藥制劑中尿囊素含量的測定方法，其特征在于:該含量測定方法包括: (1)供試品的前處理，包括取山藥0.5g或取含山藥制劑(以山藥計)0.5g，作為試品，向試品中加入30%乙醇水溶液50ml處理至少10分鐘，濾過，得到供試品溶液； (2)對照品溶液的制備，稱取尿囊素對照品，加水溶解并稀釋制成濃度為0.05mg/ml,即得； (3)采用HPLC進行測定，該HPLC的色譜條件包括，流動相為甲醇的水溶液；色譜柱為:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱與苯基硅烷鍵合硅膠柱串連而成；檢測波長為224nm ； (4)吸取對照品溶液和供試品溶液注入HPLC進行測定，按照外標方法進行計算，即得尿囊素的含量。
2.根據權利要求1所述的中藥山藥及含山藥制劑中尿囊素含量的測定方法，其特征在于:所述流動相為甲醇的水溶液，濃度為5% -20%甲醇。
3.根據權利要求1所述的中藥山藥及含山藥制劑中尿囊素含量的測定方法，其特征在于:步驟(3)色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱與苯基硅烷鍵合硅膠柱串連而成，順序依次為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱、苯基硅烷鍵合硅膠柱。
【文檔編號】G01N30/02GK103954705SQ201410192519
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月4日 優先權日:2014年5月4日
【發明者】趙棟磊 申請人:趙棟磊
專業數控銑床產品供應商
20年生產經驗，實力工廠，精工品質，質量有保障
