一種鼻腔分泌物的處理液及其處理方法
【專利摘要】本發明涉及臨床醫學領域，特別涉及一種鼻腔分泌物的處理液及其處理方法。鼻腔分泌物的處理液，包括依次使用的清洗液、消化液和保護液，先用清洗液對鼻腔分泌物進行懸浮，同時用消化液對鼻腔分泌物中的粘性成分進行裂解，并通過細胞濾網過濾和離心，去除雜質和粘性物質，然后加入保護液，使細胞在保護液中均勻分散，將均勻分散的細胞轉移至細胞濾網，再將細胞濾網上的細胞轉移至載玻片上，固定，得到細胞分布薄而均勻，清晰美觀的細胞涂片，采用顯微鏡觀察時細胞分布均勻，具有代表性，不僅細胞無重疊，而且去除了阻礙觀察的粘液和雜質的影響，并可以直接進行免疫組化染色。
【專利說明】一種鼻腔分泌物的處理液及其處理方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及臨床醫學領域，具體而言，涉及一種鼻腔分泌物的處理液及其處理方 法。
【背景技術】
[0002] 鼻腔分泌物的細胞學檢查對臨床的診斷和治療具有很重要的意義。傳統的鼻分泌 物細胞學檢查是將分泌物或粘膜刮出物直接涂在載玻片中心，干燥固定后直接進行染色處 理，但是，鼻分泌物含有大量的雜質和粘性物質，導致分泌物中的目的細胞不能在載玻片均 勻分散，不能進行免疫組化染色；此外，分泌物中的雜質還會對涂片的染色效果和結果的正 確判斷有著很大影響。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的在于提供一種鼻腔分泌物的處理液及其處理方法，以解決上述的問 題。
[0004] 在本發明的實施例中提供了一種鼻腔分泌物的處理液，包括依次使用的清洗液、 消化液和保護液；
[0005] 所述清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、 重蒸水和鹽酸，所述乙二胺四乙酸與所述重蒸水的質量體積比為〇. 2?0. 4g/L，所述甲醇 與所述重蒸水的體積比為1:0. 5?1. 5,所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的質量體積比為 1. 0?1. 5g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 2?0. 3g/L，所述氯化鈉 與所述重蒸水的質量體積比為7?9g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 1? 〇. 3g/L，所述鹽酸將清洗液pH調至7. 2?7. 4 ;
[0006] 所述消化液包括二硫蘇糖醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸水和 鹽酸，所述二硫蘇糖醇與所述重蒸水的質量體積比為90?110g/L，所述磷酸氫二鈉與所 述重蒸水的質量體積比為1. 〇?1. 5g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為 0. 2?0. 3g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為7?9g/L，所述氯化鉀與所述重蒸 水的質量體積比為〇. 1?〇. 3g/L，所述鹽酸將消化液pH調至7. 2?7. 4 ;
[0007] 所述保護液包括吐溫、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、 氯化鉀、重蒸水和鹽酸，所述吐溫與所述重蒸水的體積比為0.04?0.06:1，所述乙二胺 四乙酸與所述重蒸水的質量體積比為0. 2?0. 4g/L，所述甲醇與所述重蒸水的體積比為 1:0. 5?1. 5,所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的質量體積比為1. 0?1. 5g/L，所述磷酸二氫 鉀與所述重蒸水的質量體積比為〇. 2?0. 3g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為 7?9g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 1?0. 3g/L，所述鹽酸將保護液pH 調至7. 2?7. 4。
[0008] 優選地，所述吐溫為吐溫20、吐溫21、吐溫40、吐溫60、吐溫61、吐溫80、吐溫81 和吐溫85中的任一種或多種混合。
[0009] 優選地，所述鼻腔分泌物的處理液還包括固定液I，所述固定液I由多聚甲醛、磷 酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸水和鹽酸組成，所述多聚甲醛與所述重蒸水的 質量體積比為35?45g/L,所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的質量體積比為1. 0?1. 5g/L, 所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為〇. 2?0. 3g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的 質量體積比為7?9g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 1?0. 3g/L，所述鹽 酸將固定液I的pH調至7. 2?7. 4。
[0010] 優選地，所述鼻腔分泌物的處理液還包括固定液II，所述固定液II由甲醇和丙酮 以體積比為1 :〇. 5?1. 5配制而成。
[0011] 鼻腔分泌物的處理方法包括以下步驟：
[0012] (a)取鼻腔分泌物，將得到的鼻腔分泌物轉移至所述清洗液20?40ml中，加入所 述消化液，加入的所述消化液與所述清洗液的體積比為1?5 :100,振蕩器400?600rpm， 20?40分鐘振蕩混勻；
[0013] (b) 1500?2500rpm離心5?15分鐘，棄去上清，輕輕震散開底部的沉淀，加入 20?40ml所述保護液并混勻，用孔徑為30?200 μ m細胞濾網過濾，收集過濾液；
[0014] (C)將所述過濾液用孔徑為3?8μπι的細胞濾膜過濾，將細胞濾膜上的細胞轉移 至載玻片上，得到細胞涂片；
[0015] (d)對所述細胞涂片進行細胞固定，染色處理，然后通過顯微鏡觀察細胞涂片。
[0016] 優選地，在所述步驟（c)中，所述過濾液通過細胞涂片機制作細胞涂片。
[0017] 優選地，所述細胞涂片機制作細胞涂片具體為：
[0018] 將所述細胞濾膜進行負壓處理，當細胞濾膜上覆蓋了 8?15%面積的細胞，負壓 吸引停止，所述過濾液中的細胞吸附在所述細胞濾膜表面；
[0019] 將所述細胞濾膜吸附有細胞的一側貼附在載玻片上，通過正壓鼓氣和靜電吸附作 用，使吸附在細胞濾膜表面的細胞轉移至載玻片上，得到細胞涂片。
[0020] 優選地，在所述（d)中，所述細胞固定采用本發明提供的固定液I或固定液II進 行固定。
[0021] 優選地，在所述（b)中，所述細胞濾網的孔徑為80?100 μ m。
[0022] 優選地，在所述（a)中，采用取樣器對鼻腔分泌物進行取樣。
[0023] 本發明實施例提供的鼻腔分泌物的處理液及其處理方法，采用清洗液對鼻腔分泌 物進行懸浮，同時用消化液對鼻腔分泌物中的粘性成分進行裂解，并通過細胞濾網過濾和 離心，去除雜質和粘性物質，然后加入保護液，使細胞在保護液中均勻分散，將均勻分散的 細胞轉移至細胞濾網，再將細胞濾網上的細胞轉移至載玻片上，固定，得到細胞分布薄而均 勻，清晰美觀的細胞涂片，采用顯微鏡觀察時細胞分布均勻，具有代表性，不僅細胞無重疊， 而且去除了阻礙觀察的粘液和雜質的影響，并可以直接進行免疫組化染色。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0024] 圖1示出了本發明實施例1細胞HE染色的顯微鏡100倍鏡下觀察圖；
[0025] 圖2示出了本發明實施例1對照組細胞HE染色的顯微鏡100倍鏡下觀察圖；
[0026] 圖3示出了本發明實施例2細胞HE染色的顯微鏡100倍鏡下觀察圖；
[0027] 圖4示出了本發明實施例2對照組細胞HE染色的顯微鏡100倍鏡下觀察圖；
[0028] 圖5示出了本發明實施例3中MUC5AC染色通過顯微鏡400倍鏡觀察圖；
[0029] 圖6示出了本發明實施例3中MUC5AC染色通過顯微鏡1000倍鏡觀察圖；
[0030] 圖7示出了本發明實施例3中MUC2染色通過顯微鏡400倍鏡觀察圖；
[0031] 圖8示出了本發明實施例3中MUC2染色通過顯微鏡1000倍鏡觀察圖；
[0032] 圖9示出了本發明實施例4中tubulin染色通過顯微鏡100倍鏡觀察圖；
[0033] 圖10示出了本發明實施例4中tubulin染色通過顯微鏡1000倍鏡觀察圖。
【具體實施方式】
[0034] 下面通過具體的實施例子對本發明做進一步的詳細描述。
[0035] 本發明實施例中提供了 一種鼻腔分泌物的處理液及其處理方法。
[0036] -種鼻腔分泌物的處理液，包括依次使用的清洗液、消化液和保護液；
[0037] 所述清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、 重蒸水和鹽酸，所述乙二胺四乙酸與所述重蒸水的質量體積比為〇. 2?0. 4g/L，所述甲醇 與所述重蒸水的體積比為1:0. 5?1. 5,所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的質量體積比為 1. 0?1. 5g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 2?0. 3g/L，所述氯化鈉 與所述重蒸水的質量體積比為7?9g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 1? 〇. 3g/L，所述鹽酸將清洗液pH調至7. 2?7. 4 ;
[0038] 所述消化液包括二硫蘇糖醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸水和 鹽酸，所述二硫蘇糖醇與所述重蒸水的質量體積比為90?110g/L，所述磷酸氫二鈉與所 述重蒸水的質量體積比為1. 〇?1. 5g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為 0. 2?0. 3g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為7?9g/L，所述氯化鉀與所述重蒸 水的質量體積比為〇. 1?〇. 3g/L，所述鹽酸將消化液pH調至7. 2?7. 4 ;
[0039] 所述保護液包括吐溫、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、 氯化鉀、重蒸水和鹽酸，所述吐溫與所述重蒸水的體積比為0.04?0.06:1，所述乙二胺 四乙酸與所述重蒸水的質量體積比為0. 2?0. 4g/L，所述甲醇與所述重蒸水的體積比為 1:0. 5?1. 5,所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的質量體積比為1. 0?1. 5g/L，所述磷酸二氫 鉀與所述重蒸水的質量體積比為〇. 2?0. 3g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為 7?9g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 1?0. 3g/L，所述鹽酸將保護液pH 調至7. 2?7. 4。
[0040] 本發明實施例提供的鼻腔分泌物的處理液及其處理方法，采用清洗液對鼻腔分泌 物進行懸浮，根據分泌物中粘液的多少加入消化液，消化液對鼻腔分泌物中的粘性成分進 行裂解，并通過細胞濾網過濾和離心，去除雜質和粘性物質，然后加入保護液，使細胞在保 護液中均勻分散，將均勻分散的細胞轉移至細胞濾網，再將細胞濾網上的細胞轉移至載玻 片上，固定，得到細胞分布薄而均勻，清晰美觀的細胞涂片，采用顯微鏡觀察時細胞分布均 勻，具有代表性，不僅細胞無重疊，而且去除了阻礙觀察的粘液和雜質的影響，并可以直接 進行免疫組化染色。
[0041] 吐溫（或聚山梨酯）為非離子型表面活性劑，具有很好的保護細胞的作用。優選 地，所述吐溫為吐溫20、吐溫21、吐溫40、吐溫60、吐溫61、吐溫80、吐溫81和吐溫85中的 任一種或多種混合。
[0042] 為了得到更好的固定效果，優選地，所述鼻腔分泌物的處理液還包括固定液I，所 述固定液I由多聚甲醛、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸水和鹽酸組成，所 述多聚甲醛與所述重蒸水的質量體積比為35?45g/L，所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的質 量體積比為1. 0?1. 5g/L,所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 2?0. 3g/L, 所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為7?9g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積 比為0. 1?0. 3g/L，所述鹽酸將固定液I的pH調至7. 2?7. 4。固定液I用于常規細胞形 態學觀察的細胞的固定，固定效果好。
[0043] 優選地，所述鼻腔分泌物的處理液還包括固定液II，所述固定液II由甲醇和丙酮 以體積比為1 :〇. 5?1. 5配制而成。固定液II用于對細胞核觀察的細胞的固定，固定效果 好。
[0044] 鼻腔分泌物的處理方法包括以下步驟：
[0045] (a)取鼻腔分泌物，將得到的鼻腔分泌物轉移至所述清洗液20?40ml中，加入所 述消化液，加入的所述消化液與所述清洗液的體積比為1?5 :100,振蕩器400?600rpm， 20?40分鐘振蕩混勻；
[0046] (b) 1500?2500rpm離心5?15分鐘，棄去上清，輕輕震散開底部的沉淀，加入 20?40ml所述保護液并混勻，用孔徑為30?200 μ m細胞濾網過濾，收集過濾液；
[0047] (c)將所述過濾液用孔徑為3?8 μ m的細胞濾膜過濾，將細胞濾膜上的細胞轉移 至載玻片上，得到細胞涂片；
[0048] (d)對所述細胞涂片進行細胞固定，染色處理，然后通過顯微鏡觀察細胞涂片。
[0049] 本鼻腔分泌物的處理方法步驟簡單易行，且得到的細胞涂片細胞分布薄而均勻， 清晰美觀的細胞涂片，采用顯微鏡觀察時細胞分布均勻，具有代表性，不僅細胞無重疊，而 且去除了阻礙觀察的粘液和雜質的影響，并可以直接進行免疫組化染色。
[0050] 其中，細胞固定中細胞涂片浸入固定液20?30分鐘，以達到更好的固定效果。在 所述步驟（b)中，離心采用1500?2500rpm離心5?15分鐘，足以分散細胞，又不破壞細 胞形態。
[0051] 優選地，在所述步驟（c)中，所述過濾液通過細胞涂片機制作細胞涂片。使用細胞 涂片機制作細胞涂片，效率高，節約人力，且得到的細胞涂片細胞分布均勻。
[0052] 優選地，所述細胞涂片機制作細胞涂片具體為：
[0053] 將所述細胞濾膜進行負壓處理，當細胞濾膜上覆蓋了 8?15%面積的細胞，負壓 吸引停止，所述過濾液中的細胞吸附在所述細胞濾膜表面；
[0054] 將所述細胞濾膜吸附有細胞的一側貼附在載玻片上，通過正壓鼓氣和靜電吸附作 用，使吸附在細胞濾膜表面的細胞轉移至載玻片上，得到細胞涂片。
[0055] 采用這種方式制作細胞涂片，細胞的雜質含量少，通過控制細胞濾膜上的覆蓋細 胞的數量，可以避免細胞的重疊，且細胞在載玻片上分布薄且均勻，制得的細胞涂片進行觀 察，清晰美觀，細胞分布均勻，具有代表性，不僅細胞無重疊，而且去除了阻礙觀察的粘液和 雜質的影響，并可以直接進行免疫組化染色。
[0056] 固定液I用于常規細胞形態學觀察的細胞的固定；固定液II用于對細胞核觀察的 細胞的固定；兩者根據不同的細胞固定的觀察目的而使用，且兩者固定效果好。優選地，在 所述（d)中，所述細胞固定采用本發明提供的固定液I或固定液II進行固定。
[0057] 細胞直徑為10?20 μ m，細胞濾網是將液體成份中大于細胞體積的雜質成份過濾 掉。優選地，在所述（b)中，所述細胞濾網的孔徑為80?100 μ m。
[0058] 優選地，在所述（a)中，采用取樣器對鼻腔分泌物進行取樣。
[0059] 鼻腔分泌物取樣器，包括：刷頭、刷體和刷柄，所述刷頭和刷柄分別位于所述刷體 的兩端；
[0060] 所述刷頭的長度為3?30mm，寬度為1?5mm，厚度為2?10mm ;所述刷體的長度 為50?80mm,所述刷柄的長度為50?80mm ;
[0061] 所述刷頭為柱體，所述刷頭的前端端面和其側面分別設置有刷毛。
[0062] 優選地，所述刷體和所述刷柄之間還設置有銜接部；
[0063] 所述銜接部的一端與所述刷體連接，另一端與所述刷柄連接，所述刷體與所述刷 柄分別位于所述銜接部的兩側，所述刷柄和所述刷體的延長線之間的夾角為0?30度。 [0064] 優選地，所述刷毛的橫截面為圓形或橢圓形或十字形或多邊形。
[0065] 優選地，所述刷毛的材質為聚酰胺6,所述刷毛的橫截面直徑為0. 05?0. 5mm。
[0066] 優選地，所述刷毛的長度為2?5mm。
[0067] 優選地，所述刷毛在距所述端面或所述側面的邊緣0. 1?5mm處設置。
[0068] 優選地，所述刷柄呈長條狀，所述刷柄的橫截面為扁平狀或圓柱狀，其寬度或直徑 為2?10mm η
[0069] 優選地，所述刷體的寬度沿所述刷頭的方向逐漸減小，所述刷體與所述銜接部連 接的部位其寬度為4?6mm，所述刷體與所述刷頭連接的部位其寬度為2?3mm。
[0070] 優選地，所述刷柄的表面設置有防滑槽。
[0071] 刷頭的長度為3?30mm，刷頭的寬度為1?5mm，刷頭的厚度為2?10mm，刷體的 長度為50?80mm，刷柄的長度為50?80mm，鼻腔分泌物取樣器的大小與鼻孔相適；刷頭為 柱體，刷頭的端面和側面設置有刷毛。通過在刷頭側面設置的刷毛在鼻腔刷取，來收集鼻腔 側壁上的分泌物；通過在刷頭前端設置的刷毛，可以精準定位刷取指定范圍的分泌物，收集 的樣本定位點準確且更為全面，此外，采用刷毛收集分泌物后，刷毛直接在溶液中涮洗，刷 毛本身沒有殘留物，并且不會對標本產生額外的干擾物。
[0072] 實施例1
[0073] 清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸 水和鹽酸，所述乙二胺四乙酸與所述重蒸水的質量體積比為0. 3g/L，所述甲醇與所述重蒸 水的體積比為1:1，所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的質量體積比為1. 44g/L，所述磷酸二氫 鉀與所述重蒸水的質量體積比為〇. 24g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為8g/ L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 2g/L，所述鹽酸將清洗液pH調至7. 3 ;
[0074] 消化液包括二硫蘇糖醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸水和鹽 酸，所述二硫蘇糖醇與所述重蒸水的質量體積比為l〇〇g/L，所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水 的質量體積比為1. 44g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 24g/L，所述氯 化鈉與所述重蒸水的質量體積比為8g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 2g/ L，所述鹽酸將消化液pH調至7. 3 ;
[0075] 保護液包括吐溫-20、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化 鉀、重蒸水和鹽酸，所述吐溫-20與所述重蒸水的體積比為0.05:1，所述乙二胺四乙酸與所 述重蒸水的質量體積比為〇.3g/L，所述甲醇與所述重蒸水的體積比為1:1，所述磷酸氫二 鈉與所述重蒸水的質量體積比為1. 44g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為 0. 24g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為8g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量 體積比為0. 2g/L，所述鹽酸將保護液pH調至7. 3。
[0076] 固定液I，由多聚甲醛、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸水和鹽酸組 成，所述多聚甲醛與所述重蒸水的質量體積比為40g/L，所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的質 量體積比為1. 44g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 24g/L，所述氯化鈉 與所述重蒸水的質量體積比為8g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 2g/L，所 述鹽酸將固定液I的pH調至7. 3。
[0077] 鼻腔分泌物的處理方法，包括以下步驟：
[0078] (a)采用取樣器取鼻腔分泌物，將得到的鼻腔分泌物轉移至清洗液20ml中，加入 0. 2ml消化液，用振蕩器500rpm，20min，振蕩混勻；
[0079] (b)用離心機離心，2000rpm，lOmin，棄去上清，輕輕震散開底部的沉淀，加入30ml 保護液并混勻，用孔徑為1〇〇 μ m細胞濾網過濾，收集過濾液；
[0080] (c)將過濾液用孔徑為3μπι的細胞濾膜過濾，將細胞濾膜上的細胞轉移至載玻片 上，得到細胞涂片；
[0081] (d)采用固定液I對細胞涂片進行細胞固定，固定液對細胞涂片上的細胞固定是 將細胞涂片直接浸沒在固定液20min，用于常規細胞形態學觀察，然后進行HE染色處理，HE 染色按常規方法進行，然后通過顯微鏡100倍觀察細胞涂片，結果如圖1所示；對照組采用 常規的方式處理鼻腔分泌物然后進行HE染色處理，然后通過顯微鏡100倍觀察細胞涂片， 結果如圖2所示。從圖1可以看出，細胞分散效果好，且基本沒有重疊現象，而圖2中細胞 重疊嚴重，分散性差。
[0082] 實施例2
[0083] 清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸 水和鹽酸，所述乙二胺四乙酸與所述重蒸水的質量體積比為0. 2g/L，所述甲醇與所述重蒸 水的體積比為1:0. 5,所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的質量體積比為1. Og/L，所述磷酸二 氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為〇. 2g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為7g/ L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. lg/L，所述鹽酸將清洗液pH調至7. 2 ;
[0084] 消化液包括二硫蘇糖醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸水和鹽 酸，所述二硫蘇糖醇與所述重蒸水的質量體積比為90g/L，所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的 質量體積比為1. 〇g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 2g/L，所述氯化鈉 與所述重蒸水的質量體積比為7g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. lg/L，所 述鹽酸將消化液pH調至7. 2;
[0085] 保護液包括吐溫-80、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化 鉀、重蒸水和鹽酸，所述吐溫-80與所述重蒸水的體積比為0.04:1，所述乙二胺四乙酸與所 述重蒸水的質量體積比為〇. 2g/L，所述甲醇與所述重蒸水的體積比為1:0. 5,所述磷酸氫 二鈉與所述重蒸水的質量體積比為1. 〇g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為 0. 2g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為7g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量 體積比為0. lg/L，所述鹽酸將保護液pH調至7. 2。
[0086] 固定液I，由多聚甲醛、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸水和鹽酸組 成，所述多聚甲醛與所述重蒸水的質量體積比為35g/L，所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的質 量體積比為1. 〇g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 2g/L，所述氯化鈉與 所述重蒸水的質量體積比為7g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. lg/L，所述 鹽酸將固定液I的pH調至7. 2。
[0087] 鼻腔分泌物的處理方法，包括以下步驟：
[0088] (a)采用取樣器取鼻腔分泌物，將得到的鼻腔分泌物轉移至清洗液20ml中，加入 0. 2ml消化液，用振蕩器500rpm，20min，振蕩混勻；
[0089] (b)用離心機離心，2000rpm，lOmin，棄去上清，輕輕震散開底部的沉淀，加入30ml 保護液并混勻，用孔徑為80 μ m細胞濾網過濾，收集過濾液；
[0090] (c)將過濾液用孔徑為3μπι的細胞濾膜過濾，將細胞濾膜上的細胞轉移至載玻片 上，得到細胞涂片；
[0091] (d)采用固定液I對細胞涂片進行細胞固定，固定液對細胞涂片上的細胞固定是 將細胞涂片直接浸沒在固定液20min，用于常規細胞形態學觀察，然后進行HE染色處理，HE 染色按常規方法進行，通過顯微鏡100倍觀察細胞涂片，結果如圖3所示；對照組采用常規 的方式處理鼻腔分泌物然后進行HE染色處理，然后通過顯微鏡100倍觀察細胞涂片，結果 如圖4所示。從圖3可以看出，細胞分散效果好，且基本沒有重疊現象，而圖4中細胞重疊 嚴重，分散性差。
[0092] 實施例3
[0093] 清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸 水和鹽酸，所述乙二胺四乙酸與所述重蒸水的質量體積比為〇.4g/L，所述甲醇與所述重蒸 水的體積比為1:1. 5,所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的質量體積比為1. 5g/L，所述磷酸二 氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為〇. 3g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為9g/ L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 3g/L，所述鹽酸將清洗液pH調至7. 4 ;
[0094] 消化液包括二硫蘇糖醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸水和鹽 酸，所述二硫蘇糖醇與所述重蒸水的質量體積比為ll〇g/L，所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水 的質量體積比為1. 5g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 3g/L，所述氯化 鈉與所述重蒸水的質量體積比為9g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 3g/L， 所述鹽酸將消化液pH調至7. 4 ;
[0095] 保護液包括吐溫-20、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化 鉀、重蒸水和鹽酸，所述吐溫-20與所述重蒸水的體積比為0.06:1，所述乙二胺四乙酸與所 述重蒸水的質量體積比為〇.4g/L，所述甲醇與所述重蒸水的體積比為1:1. 5,所述磷酸氫 二鈉與所述重蒸水的質量體積比為1. 5g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為 〇. 3g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為9g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量 體積比為0. 3g/L，所述鹽酸將保護液pH調至7. 4。
[0096] 固定液II由甲醇和丙酮以體積比為1 :0. 5配制而成。
[0097] 鼻腔分泌物的處理方法，包括以下步驟：
[0098] (a)采用取樣器取鼻腔分泌物，將得到的鼻腔分泌物轉移至清洗液40ml中，加入 lml消化液，用振蕩器600rpm，30min，振蕩混勻；
[0099] (b)用離心機離心，1500rpm，15min，棄去上清，輕輕震散開底部的沉淀，加入40ml 保護液并混勻，用孔徑為200 μ m細胞濾網過濾，收集過濾液；
[0100] (c)將過濾液用孔徑為8μπι的細胞濾膜過濾，將細胞濾膜上的細胞轉移至載玻片 上，得到細胞涂片；
[0101] (d)采用固定液II進行固定，用于對細胞核的觀察，固定液對細胞涂片上的細胞 固定是將細胞涂片直接浸沒在固定液l〇min，取出，然后進行免疫組化染色，MUC5AC染色和 MUC2染色，分別通過顯微鏡400倍和1000倍觀察細胞涂片，MUC5AC染色通過顯微鏡400倍 如圖5所示；MUC5AC染色通過顯微鏡1000倍如圖6所示；MUC2染色通過顯微鏡400倍如圖 7所示；MUC2染色通過顯微鏡1000倍如圖8所示。從圖5?8中可以看出，細胞染色效果 非常好，且觀察背景純凈，無其他雜質干擾。
[0102] 實施例4
[0103] 清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸 水和鹽酸，所述乙二胺四乙酸與所述重蒸水的質量體積比為〇. 2g/L，所述甲醇與所述重蒸 水的體積比為1:0. 5,所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的質量體積比為1. Og/L，所述磷酸二 氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為〇. 2g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為7g/ L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. lg/L，所述鹽酸將清洗液pH調至7. 2 ;
[0104] 消化液包括二硫蘇糖醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸水和鹽 酸，所述二硫蘇糖醇與所述重蒸水的質量體積比為l〇〇g/L，所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水 的質量體積比為1. 〇g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 2g/L，所述氯化 鈉與所述重蒸水的質量體積比為7g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. lg/L， 所述鹽酸將消化液pH調至7. 2 ;
[0105] 保護液包括吐溫-60、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化 鉀、重蒸水和鹽酸，所述吐溫-60與所述重蒸水的體積比為0.04:1，所述乙二胺四乙酸與所 述重蒸水的質量體積比為〇. 2g/L，所述甲醇與所述重蒸水的體積比為1:0. 5,所述磷酸氫 二鈉與所述重蒸水的質量體積比為1. 〇g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為 0. 2g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為7g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量 體積比為0. lg/L，所述鹽酸將保護液pH調至7. 2。
[0106] 固定液II由甲醇和丙酮以體積比為1 :1. 5配制而成。
[0107] 鼻腔分泌物的處理方法，包括以下步驟：
[0108] (a)采用取樣器取鼻腔分泌物，將得到的鼻腔分泌物轉移至清洗液30ml中，加入 0. 3ml消化液，用振蕩器400rpm，40min，振蕩混勻；
[0109] (b)用離心機離心，2500rpm，5min，棄去上清，輕輕震散開底部的沉淀，加入20ml 保護液并混勻，用孔徑為30 μ m細胞濾網過濾，收集過濾液；
[0110] (C)將過濾液用孔徑為5μπι的細胞濾膜過濾，將細胞濾膜上的細胞轉移至載玻片 上，得到細胞涂片；
[0111] (d)采用固定液II進行固定，用于對細胞核的觀察，固定液對細胞涂片上的細 胞固定是將細胞涂片直接浸沒在固定液15min，取出，然后進行免疫組化染色，然后進行 tubulin染色，分別通過顯微鏡100倍（圖9)和1000倍（圖10)觀察細胞涂片。從圖9和 圖10中可以看出，細胞染色效果非常好，且觀察背景純凈，無其他雜質干擾。
[0112] 本發明提供的鼻腔分泌物的處理液及其處理方法，不僅繼承了傳統檢查方法的所 有優點，更解決傳統分泌物涂片技術存在細胞丟失、不能全部被染色、分泌物中粘性液體、 雜質存在和細胞不能均勻分散、重疊等對結果正確判斷的影響問題。采用本發明提供的鼻 腔分泌物的處理液及其處理方法，使鼻分泌物中的有效目的細胞呈單層、均勻地平鋪到載 玻片上，制成細胞成份豐富、背景清晰、形態完整、分布均勻的超薄細胞涂片，并可以直接進 行免疫組化染色，對結果判斷的準確性大大提高。
[0113] 以上所述僅為本發明的優選實施例而已，并不用于限制本發明，對于本領域的技 術人員來說，本發明可以有各種更改和變化。凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修 改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1. 一種鼻腔分泌物的處理液，其特征在于，包括依次使用的清洗液、消化液和保護液； 所述清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸 水和鹽酸，所述乙二胺四乙酸與所述重蒸水的質量體積比為0. 2?0. 4g/L，所述甲醇與所 述重蒸水的體積比為1:0. 5?1. 5,所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的質量體積比為1. 0? 1. 5g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 2?0. 3g/L，所述氯化鈉與所述 重蒸水的質量體積比為7?9g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 1?0. 3g/ L，所述鹽酸將清洗液pH調至7. 2?7. 4 ; 所述消化液包括二硫蘇糖醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重蒸水和鹽 酸，所述二硫蘇糖醇與所述重蒸水的質量體積比為90?110g/L，所述磷酸氫二鈉與所述重 蒸水的質量體積比為1. 〇?1. 5g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積比為0. 2? 〇. 3g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為7?9g/L，所述氯化鉀與所述重蒸水的 質量體積比為〇. 1?〇. 3g/L，所述鹽酸將消化液pH調至7. 2?7. 4 ; 所述保護液包括吐溫、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、 重蒸水和鹽酸，所述吐溫與所述重蒸水的體積比為〇. 04?0. 06:1，所述乙二胺四乙酸與所 述重蒸水的質量體積比為〇. 2?0. 4g/L，所述甲醇與所述重蒸水的體積比為1:0. 5?1. 5， 所述磷酸氫二鈉與所述重蒸水的質量體積比為1. 〇?1. 5g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸 水的質量體積比為〇. 2?0. 3g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為7?9g/L，所 述氯化鉀與所述重蒸水的質量體積比為〇. 1?〇. 3g/L，所述鹽酸將保護液pH調至7. 2? 7. 4。
2. 根據權利要求1所述的鼻腔分泌物的處理液，其特征在于，所述吐溫為吐溫20、吐溫 21、吐溫40、吐溫60、吐溫61、吐溫80、吐溫81和吐溫85中的任一種或多種混合。
3. 根據權利要求1所述的鼻腔分泌物的處理液，其特征在于，所述鼻腔分泌物的處理 液還包括固定液I，所述固定液I由多聚甲醛、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、重 蒸水和鹽酸組成，所述多聚甲醛與所述重蒸水的質量體積比為35?45g/L，所述磷酸氫二 鈉與所述重蒸水的質量體積比為1. 〇?1. 5g/L，所述磷酸二氫鉀與所述重蒸水的質量體積 比為0. 2?0. 3g/L，所述氯化鈉與所述重蒸水的質量體積比為7?9g/L，所述氯化鉀與所 述重蒸水的質量體積比為〇. 1?〇. 3g/L，所述鹽酸將固定液I的pH調至7. 2?7. 4。
4. 根據權利要求1所述的鼻腔分泌物的處理液，其特征在于，所述鼻腔分泌物的處理 液還包括固定液II，所述固定液II由甲醇和丙酮以體積比為1 :0.5?1.5配制而成。
5. 采用權利要求1或2所述的處理液進行鼻腔分泌物的處理方法，其特征在于，包括以 下步驟： (a) 取鼻腔分泌物，將得到的鼻腔分泌物轉移至所述清洗液20?40ml中，加入所述消 化液，加入的所述消化液與所述清洗液的體積比為1?5 :100,振蕩器400?600rpm，20? 40分鐘振蕩混勻； (b) 1500?2500rpm離心5?15分鐘，棄去上清，輕輕震散開底部的沉淀，加入20? 40ml所述保護液并混勻，用孔徑為30?200 μ m細胞濾網過濾，收集過濾液； (c) 將所述過濾液用孔徑為3?8 μ m的細胞濾膜過濾，將細胞濾膜上的細胞轉移至載 玻片上，得到細胞涂片； (d) 對所述細胞涂片進行細胞固定，染色處理，然后通過顯微鏡觀察細胞涂片。
6. 根據權利要求5所述的鼻腔分泌物的處理方法，其特征在于，在所述步驟（c)中，所 述過濾液通過細胞涂片機制作細胞涂片。
7. 根據權利要求6所述的鼻腔分泌物的處理方法，其特征在于，所述細胞涂片機制作 細胞涂片具體為： 將所述細胞濾膜進行負壓處理，當細胞濾膜上覆蓋了 8?15%面積的細胞，負壓吸引 停止，所述過濾液中的細胞吸附在所述細胞濾膜表面； 將所述細胞濾膜吸附有細胞的一側貼附在載玻片上，通過正壓鼓氣和靜電吸附作用， 使吸附在細胞濾膜表面的細胞轉移至載玻片上，得到細胞涂片。
8. 根據權利要求5所述的鼻腔分泌物的處理方法，其特征在于，在所述（d)中，所述細 胞固定采用權利要求3中的固定液I或權利要求4中的固定液II進行固定。
9. 根據權利要求5所述的鼻腔分泌物的處理方法，其特征在于，在所述（b)中，所述細 胞濾網的孔徑為80?100 μ m。
10. 根據權利要求5所述的鼻腔分泌物的處理方法，其特征在于，在所述（a)中，采用取 樣器對鼻腔分泌物進行取樣。
【文檔編號】G01N1/28GK104215490SQ201410497784
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年9月25日 優先權日:2014年9月25日
【發明者】張羅, 佘文煜, 楊軍 申請人:張羅, 佘文煜
專業數控銑床產品供應商
20年生產經驗，實力工廠，精工品質，質量有保障
