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一種鼻咽部粘膜細(xì)胞線粒體損傷的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種鼻咽部粘膜細(xì)胞線粒體損傷的檢測方法，包括以下檢測步驟：取鼻咽部滲液；把鼻咽部滲液置于預(yù)裝有緩沖液的取樣瓶中，混勻；在樣本瓶內(nèi)順序加入試劑A1ml，試劑B1ml；混勻，2分鐘內(nèi)觀察顏色變化，與比色板比對檢測結(jié)果；本發(fā)明簡單、快速、可檢測出的最低游離亞鐵原卟啉的濃度可達(dá)5ng/ml，靈敏度極高。
【專利說明】一種鼻咽部粘膜細(xì)胞線粒體損傷的檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種檢測方法，具體涉及一種鼻咽部粘膜細(xì)胞線粒體損傷的檢測方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 線粒體是人體細(xì)胞中最重要的細(xì)胞器，是細(xì)胞的"動力工廠"。對受損鼻咽部粘膜 細(xì)胞線粒體的檢測包括對線粒體滲透轉(zhuǎn)換孔（mitochon2dria permeability transition pore，MPTP)的檢測、膜磷脂的檢測、膜電位的檢測、2mtDNA損傷檢測、細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度檢 測等。此類檢測操作十分復(fù)雜，需要精密的儀器設(shè)備，一般實(shí)驗(yàn)室很難完成，使鼻咽部粘膜 細(xì)胞線粒體損傷檢測受到極大限制。在如上高難度檢測之前，使用一種操作簡單、成本低廉 的方法，對鼻咽部粘膜細(xì)胞線粒體是否損傷進(jìn)行初步篩查，會對鼻咽部粘膜細(xì)胞線粒體是 否損傷起到啟示作用，對是否需要進(jìn)一步進(jìn)行如上高難度檢測起到指示作用。因此，研究發(fā) 明一種鼻咽部粘膜細(xì)胞線粒體損傷檢測技術(shù)具有很重要的意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)中檢測鼻咽部粘膜細(xì)胞線粒體損傷的方法中操作復(fù)雜、設(shè)備昂 貴、難以實(shí)施的問題，本發(fā)明提供了一種檢測鼻咽部滲液細(xì)胞游離亞鐵原卟啉、進(jìn)而了解鼻 咽部粘膜細(xì)胞線粒體有否損傷的檢測方法，本發(fā)明提供的方法簡單易行，成本低廉，可快速 地篩查鼻咽部粘膜細(xì)胞線粒體有否損傷。
[0004] 本發(fā)明提供的鼻咽部粘膜細(xì)胞線粒體損傷的檢測方法，包括以下檢測步驟： 1)取鼻咽部滲液0. 5-1 ml ； 2)把鼻咽部滲液置于預(yù)裝有緩沖液的取樣瓶中，混勻；樣本瓶內(nèi)預(yù)裝有醋酸緩沖液，緩 沖液的量為2ml，混勻，得樣本液；優(yōu)選的，醋酸緩沖液PH值為4. 5 ; 3)在樣本瓶內(nèi)順序加入試劑A lml，試劑B lml ;混勻，2分鐘內(nèi)觀察顏色變化，與比色板 比對檢測結(jié)果； 所述試劑A為二（4. 二甲氨基苯基)甲烷，用甲醇溶解后配制成溶液；優(yōu)選的，二（4. 二 甲氨基苯基）甲烷溶液濃度為0. 002mol/L ； 所述試劑B為過氧化氫溶液；優(yōu)選的，過氧化氫溶液為1. 5%。
[0005] 顯藍(lán)色或深藍(lán)色，可判定樣本中含有游離亞鐵原卟啉，線粒體有損傷。
[0006] 在某些因素的作用下，鼻咽部粘膜細(xì)胞穩(wěn)態(tài)失調(diào)，出現(xiàn)能量代謝重編程。鼻咽部粘 膜細(xì)胞代謝出現(xiàn)瓦博格氏效應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)低氧和還原態(tài)微環(huán)境，激活氧感受器和缺氧信 號傳導(dǎo)通路，促使缺氧特異性轉(zhuǎn)錄因子-低氧誘導(dǎo)因子和第二信使-活性氧族活性增高， 改變細(xì)胞色素等細(xì)胞蛋白（HP)的極性量值，使位居蛋白疏水核中的細(xì)胞游離亞鐵原卟啉 (Cells Free Ferrous Protoporphyrin )析出。細(xì)胞游離亞鐵原卩卜啉催生多種自由基，引起 細(xì)胞膜脂質(zhì)、脂蛋白、細(xì)胞骨架、DNA等的氧化損傷，可使線粒體出現(xiàn)線粒體單價(jià)電子滲漏 (univalent leak);胞內(nèi)Ca2+超載，觸發(fā)線粒體攝取Ca2+并使Ca2+在線粒體內(nèi)積聚；抑制
【權(quán)利要求】
1. 一種鼻咽部粘膜細(xì)胞線粒體損傷的檢測方法，包括以下檢測步驟： 1)取鼻咽部滲液0. 5-1 ml ； 2)把鼻咽部滲液置于預(yù)裝有緩沖液的取樣瓶中，混勻；預(yù)裝的緩沖液為醋酸緩沖液，緩 沖液的量為2ml，混勻，得樣本液； 3)在樣本瓶內(nèi)順序加入試劑A lml，試劑B lml ;混勻，2分鐘內(nèi)觀察顏色變化，與比色板 比對檢測結(jié)果； 所述試劑A為二（4. 二甲氨基苯基）甲烷，用甲醇溶解后配制成溶液； 所述試劑B為過氧化氫溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的醋酸緩沖液PH值為4. 5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述的二（4. 二甲氨基苯基）甲烷溶 液濃度為0. 002mol/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的過氧化氫溶液的濃縮為1. 5%。
【文檔編號】G01N21/78GK104048961SQ201410329563
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年7月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月11日
【發(fā)明者】溫鑫, 崔子倫 申請人:青島貝爾奧生物科技有限公司