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一種多色熒光免疫層析蛋白芯片的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種多色免疫層析蛋白芯片，屬于免疫診斷【技術領域】。該芯片包括粘性底板、樣品墊、結合墊、分析膜、吸水墊；所述樣品墊、結合墊、分析膜、吸水墊以適當重疊關系置于粘性底板上；所述結合墊有若干種不同檢測探針-熒光物質和示蹤物-質控探針結合物；所述分析膜上有檢測區，檢測區包括若干檢測矩陣，每一檢測矩陣包含若干種不同檢測探針和質控探針，每一檢測探針特異對應一種被檢靶標，每一質控探針特異對應一種被檢靶標質控流程。本發明將蛋白芯片、免疫層析和多色熒光技術相互融合，實現了增加檢測矩陣面積，提高檢測精密度和降低漏診概率的需求。
【專利說明】一種多色熒光免疫層析蛋白芯片

【技術領域】
[0001]本發明屬于免疫診斷【技術領域】，尤其是涉及一種多色熒光免疫層析蛋白芯片，將免疫層析技術、蛋白芯片和多色熒光技術相互融合，實現增加檢測矩陣面積，提高檢測精密度和降低漏診概率的需求。

【背景技術】
[0002]免疫層析法是近幾年來國外興起的一種快速診斷技術，其原理是將特異的抗體先固定于硝酸纖維素膜的某一區帶，當該干燥的硝酸纖維素一端浸入樣品(尿液或血清)后，由于毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當移動至固定有抗體的區域時，樣品中相應的抗原即與該抗體發生特異性結合，若用免疫膠體金、免疫酶染色或熒光可使該區域顯示一定的顏色，從而實現特異性的免疫診斷。就現有技術來講，免疫層析技術是一種較成熟、簡便、快捷的現場檢測手段，但其通常只能對一種靶標進行分析，無法實現高通量檢測。
[0003]免疫層析蛋白芯片技術在申請號為201010257719.5等專利中有詳細的描述，可以克服免疫層析技術無法高通量檢測以及芯片技術操作復雜無法現場使用的缺點。能夠實現一次加樣同步檢測多種目標物。當樣品加入樣品墊位置，經過樣品墊的過濾和緩沖作用進入分析膜區域，相應的抗原與分析膜與樣品墊交接處相應的特異性免疫熒光微球結合后，沿著分析膜向前層析移動，各免疫熒光微球移動至膜上固定有抗體的不同區域后各自發生特異性結合，在不同的區域呈現出與樣本中檢測物濃度相關的不同顏色、光、電、磁信號的強度。特定波長激發下檢測熒光強度即可根據標準曲線定量計算得需分析指標的濃度值。
[0004]傳統的免疫層析蛋白芯片技術是在分析膜上不同的區域固定不同的抗體，為實現數十種不同指標的檢測，只能將結合抗體在分析膜上以很小的面積區域固定，該區域被稱為檢測矩陣。而在樣品層析時，難免會出現濃度不均勻的現象，即需要和某一特定檢測矩陣特異性結合的組分的主濃度峰并未通過相對應的檢測矩陣，因為檢測矩陣面積太小。這樣會導致試紙條的精密度變差，甚至引起漏檢。故在實際開發中，傳統的免疫層析芯片上難以支撐足夠多指標的同時檢測。


【發明內容】

[0005]為了克服傳統的免疫層析蛋白芯片技術難以支撐足夠多指標的同時檢測的不足，本發明提供一種免疫層析蛋白多色熒光芯片，該免疫層析蛋白多色熒光芯片采用免疫層析蛋白多色熒光芯片技術，該芯片大幅增加檢測矩陣的面積，降低上述因層析的不均一性引起的精密度變差以及漏診的概率，更好的符合了多指標同時準確檢測的需求。
[0006]本發明解決其技術問題所采用的技術方案是:在粘性底襯上，樣品墊、結合墊、分析膜、吸水墊按照適當的重疊關系固定。
[0007]其中，粘性低襯是單面涂有壓力敏感膠的硬質物質；
其中，結合墊是具有較大床體積且微觀結構勻稱的物質，結合墊中有若干種檢測結合物和質控結合物，檢測結合物由若干種熒光物質和檢測探針連接而成，并與被檢靶標特異性的一一對應，質控結合物由示蹤物和質控探針連接而成，質控層析過程正常與否；
其中，分析膜是微觀結構勻稱的物質，分析膜設有一個檢測區，每個檢測區包括若干檢測矩陣，每個檢測矩陣包含三種及三種以上不同的檢測探針，并且每個檢測矩陣所含的檢測探針都不相同，在同一檢測矩陣(本芯片檢測矩陣可以和質控矩陣可以相互重疊)中包含若干種的檢測探針或質控探針，檢測矩陣的每一種檢測探針一一對應被檢靶標中每一種特異性檢測，檢測矩陣的質控每一種質控探針一一對應被檢靶標每一種質控流程；
其中，吸水墊是具有較大床體積的物質；
其中，結合墊中的檢測結合物含有的不同熒光物質和不同的檢測探針，一種特定的熒光物質只和一種特定的檢測探針結合，并且只針對性的和每個檢測矩陣中的某一種特定的檢測探針發生特異性反應(如有結合墊上有六種檢測結合物:檢測探針『熒光八、檢測探針13-突光8、檢測探針突光 ?:、檢測探針(1-突光八、檢測探針6-突光8、檢測探針突光〇，分析膜上有兩個檢測矩陣，檢測矩陣I有123檢測矩陣II有456，共有六種檢測探針，共有六個檢測探針，則檢測探針3 -熒光八只針對檢測矩陣I中檢測探針1結合，檢測探針6 -熒光8只針對檢測矩陣I的檢測探針2結合，檢測探針0 -熒光只針對檢測矩陣I中的檢測探針3結合；檢測探針(1 -熒光八只針對檢測矩陣2中檢測探針II結合，檢測探針0 -熒光8只針對檢測矩陣II的檢測探針2結合，檢測探針？-熒光只針對檢測矩陣II中的檢測探針3結合),并通過儀器對對發生的反應進行檢測。
[0008]本發明的有益效果是:本發明免疫層析蛋白多色熒光芯片實現方式包括夾心模式、間接模式和競爭模式等，能同時在同一檢測矩陣中實現多種檢測指標，大幅增加檢測矩陣的面積，降低了因層析的不均一性引起的精密度變差以及漏診的概率，更好的符合了多指標同時準確檢測的需求，提高檢測準確率，節約成本。
[0009]

【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]下面結合附圖和實施例對本發明進一步說明圖1是本發明的整體示意圖圖中1粘性底襯，2樣品墊，3結合墊，4分析膜，5吸水墊，6檢測矩陣

【具體實施方式】
[0011]在圖1中在粘性底襯1上，樣品墊2、結合墊3、分析膜4、吸水墊5按照適當的重疊關系固定。
[0012]其中，粘性低襯1是單面涂有壓力敏感膠的硬質物質；
其中，結合墊3是具有較大床體積且微觀結構勻稱的物質，結合墊2中有若干種檢測結合物和質控結合物，檢測結合物由若干種熒光物質和檢測探針連接而成，并與被檢靶標特異性的一一對應，質控結合物由示蹤物和質控探針連接而成，質控層析過程正常與否；其中，分析膜4是微觀結構勻稱的物質，分析膜4設有一個檢測區，每個檢測區包括若干檢測矩陣6，每個檢測矩陣包含三種及三種以上不同的檢測探針，并且每個檢測矩陣所含的檢測探針都不相同，在同一檢測矩陣(本芯片檢測矩陣可以和質控矩陣可以相互重疊)中包含若干種的檢測探針或質控探針，檢測矩陣6的每一種檢測探針對應被檢祀標中每一種特異性檢測，檢測矩陣6的質控每一種質控探針一一對應被檢靶標每一種質控流程；
其中，吸水墊5是具有較大床體積的物質；
其中，結合墊3中的檢測結合物含有的不同熒光物質和不同的檢測探針，一種特定的熒光物質只和一種特定的檢測探針結合，并且只針對性的和每個檢測矩陣5中的某一種特定的檢測探針發生特異性反應(如有結合墊上有六種檢測結合物:檢測探針『熒光八、檢測探針卜突光8、檢測探針突光 ?:、檢測探針(1-突光八、檢測探針6-突光8、檢測探針熒光I分析膜上有兩個檢測矩陣，檢測矩陣I有123檢測矩陣II有456，共有六種檢測探針，共有六個檢測探針，則檢測探針3 -熒光八只針對檢測矩陣I中檢測探針1結合，檢測探針6 -熒光8只針對檢測矩陣I的檢測探針2結合，檢測探針0 -熒光只針對檢測矩陣I中的檢測探針3結合；檢測探針(1 -熒光八只針對檢測矩陣2中檢測探針II結合，檢測探針6 -熒光8只針對檢測矩陣II的檢測探針2結合，檢測探針？-熒光只針對檢測矩陣II中的檢測探針3結合),并通過儀器對對發生的反應進行檢測。
[0013]本發明進行生物靶標檢測的方法如下:
4.添加樣品:將液體樣品或者經過處理的液體樣品滴加至本發明免疫層析芯片的樣品塾2上；
5.層析反應:靜置數分鐘等待層析反應完成，層析過程中，樣品墊2中的檢測結合物、被檢靶標和分析膜4的檢測矩陣中的若干種檢測探針發生特異性的免疫反應，在分析膜的檢測矩陣上發生熒光物質結合量的變化，該結合量直接反映了被檢靶標的有無或者多少；
6.結果判讀:本發明免疫層析芯片由于被檢靶標反應在分析膜的檢測矩陣中位置明確固定，因而通過儀器對示蹤物的信號進行判讀，即可實現:了解層析過程是否正常進行和被檢靶標的定性定量檢測和分析。
【權利要求】
1.一種免疫層析蛋白多色熒光芯片，在粘性底襯上，樣品墊、合墊、分析膜、吸水墊按照適當的重疊關系固定，其特征是:該芯片分析膜設有一個檢測區，每個檢測區包括若干檢測矩陣，在同一檢測矩陣(檢測矩陣可以和質控矩陣相互重疊)中包含若干種的檢測探針和質控探針，檢測區的每一種檢測探針一一對應被檢靶標中每一種特異性檢測，檢測區的每一種質控探針 對應被檢IE標每一種質控流程；該芯片結合墊中有若干種檢測結合物和質控結合物，檢測結合物由若干種熒光物質和檢測探針連接而成，并與被檢靶標特異性的一一對應，質控結合物由示蹤物和質控探針連接而成，質控層析過程常與否。
2.根據權利要求1所述的芯片，其特征是:分析膜是微觀結構勻稱的物質，分析膜設有一個檢測區，每個檢測區包括若干檢測矩陣，在同一檢測矩陣(檢測矩陣可以和質控矩陣可以相互重疊)中包含若干種的檢測探針和質控探針，檢測區的每一種檢測探針一一對應被檢靶標中每一種特異性檢測,檢測區的質控每一種質控探針--對應被檢靶標每一種質控流程。
3.根據權利要求1所述的芯片，其特征是:結合墊中有若干種檢測結合物和質控結合物，檢測結合物由若干種熒光物質和檢測探針連接而成，并與被檢靶標特異性的一一對應，質控結合物由示蹤物和質控探針連接而成，質控層析過程常與否。
4.根據權利要求1所述的芯片，其特征是:結合墊中的檢測結合物含有的不同熒光物質和不同的檢測探針，一種特定的熒光物質只和一種特定的檢測探針結合，并且只針對性的和每個檢測矩陣中的某一種特定的檢測探針發生特異性反應。
5.根據權利要求1所述的芯片，其特征是:實現方式包括夾心模式、間接模式和競爭模式等，能同時在同一檢測矩陣中實現多種檢測指標。
【文檔編號】G01N33/558GK104280544SQ201410151364
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2014年4月16日 優先權日:2014年4月16日
【發明者】蘇恩本, 金晶, 錢瑾, 李潔, 許行尚 申請人:南京基蛋生物科技有限公司