一種cetp抑制劑的分離檢測方法
【專利摘要】一種分離檢測安塞曲匹及其異構體的方法，用CHIRALPAK?AD-H手性色譜柱(250*4.6mm)為分離色譜柱，以正己烷：異丙醇＝95:5(V/V)為流動相，可以將安塞曲匹與其3個光學異構體進行基線分離，可以有效控制安塞曲匹異構體雜質以及非對映異構體的含量。本發明的方法能簡單、快速、準確的分離檢測出安塞曲匹及其光學異構體。
【專利說明】—種CETP抑制劑的分罔檢測方法
【技術領域】
[0001]本申請涉及藥物化學領域，具體涉及合成抑制膽固醇酯轉移蛋白(CETP)的化合物的方法。
【背景技術】
[0002]中國專利申請CN 200580022618.7公開一系列膽固醇酯轉移蛋白抑制劑(CETP)，其中安塞曲匹，可以增加高密度脂蛋白(HDL)膽固醇和載脂蛋白Al，并減少低密度脂蛋白(LDL)膽固醇和載脂蛋白B，可以潛在治療血脂異常并預防動脈粥樣硬化。安塞曲匹其化學名稱為(4S, 5R)_5_[3，5-雙(二氟甲基)苯基]-3-{[4' _氟-5 ' _異丙基-2' _甲氧基-4-(三氟甲基)聯苯基-2-基]甲基}-4_甲基-1，3-噁唑烷-2-酮，其化學結構如式
(I)所示:
[0003]
Yr
r\-CF3
p3c(I)0
[0004]安塞曲匹的分子中存在2個手性中心，因此，存在一個對映異構體雜質以及兩個非對映異構體。在生產安塞曲匹的過程中需要進行質量控制，但目前，《美國藥典》USP、《歐洲藥典》EP及《中國藥典》Ch.P.均沒有收載安塞曲匹，也未查到有關文獻報道安塞曲匹及其異構體的分離檢測方法。為了更好更準確的控制產品中異構體的含量，保證原料藥以及制劑產品的質量，發明人開發了適合于安塞曲匹原料藥的異構體含量測定的分析方法。本發明的方法能簡單、快速、準確地分離、檢測出安塞曲匹及其異構體雜質。
【發明內容】
[0005]目前，未發現對安塞曲匹光學異構體分析方法的報道，我們經過反復試驗以及研究，用CHIRALPAK AD-H手性色譜柱(250*4.6mm)為分離色譜柱，以正己烷:異丙醇=95:5(V/V)為流動相，可以將安塞曲匹與其3個光學異構體進行基線分離，可以有效控制安塞曲匹異構體雜質以及非對映異構體的的含量。本發明的方法能簡單、快速、準確的分離檢測出安塞曲匹及其光學異構體。
[0006]術語定義
[0007]術語“安塞曲匹”是指(4S，5R)-5_[3，5-雙(三氟甲基)苯基]-3-{[4'-氟-5'-異丙基-2'-甲氧基-4-(三氟甲基)聯苯基-2-基]甲基}-4_甲基-1，3-噁唑烷-2-酮。
[0008]在本發明上下文中，無論是否使用“大約”或“約”等字眼，所有在此公開了的數字均為近似值。每一個數字的數值有可能會出現5%或10%等的差異。
[0009]發明詳述
[0010]一種分離檢測安塞曲匹及其異構體的方法，其特征在于，用填料為涂覆直鏈淀粉類或鍵合纖維素類的手性色譜柱為分離色譜柱，以低級烷烴和/或醇類溶劑為流動相。
[0011 ] 在一些實施例中，所述的手性色譜柱為CHIRALPAK AD_H。
[0012]在一些實施例中，所述的低級烷烴為正己烷、環己烷、正戊烷、正庚烷的一種或幾種。
[0013]在一些實施例中，所述的醇類溶劑為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇的一種或幾種。
[0014]在一些實施例中，所述低級烷烴與醇類溶劑的體積比為100:0至80:20，在某些實施例中，低級烷烴與醇類溶劑的體積比為95:5。
[0015]在一些實施例中，所述的流動相為正己烷和異丙醇，其體積比為95:5。
[0016]進一步地，為了實現本發明的分離檢測，本發明采用以下檢測儀器及檢測條件:
[0017]色譜柱為CHIRALPAK AD-H。
[0018]檢測器為DAD檢測器，檢測波長230nm-270nm，優選250nm。
[0019]流速為0.3-1.lml/min,優先 0.6mT,/miη。
[0020]柱溫為20-40 V，優先 30 V。
[0021]進樣量為2-30 μ L，優選15 μ L。
[0022]運行時間為80分鐘以內。
[0023]供試液配制:用稀釋劑將供試品配制成0.3-5mg/ml,優選lmg/ml的溶液。
[0024]在一些實施例中，安塞曲匹及其異構體的分離檢測包括以下步驟:
[0025]a)取一定量的安塞曲匹及其異構體混合物，用正庚烷作為稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，
[0026]b)取供試品溶液，按如下的條件進行高效液相色譜分析:
[0027]以CHIRALPAK AD-H (4.6x 250mm)為分離柱；紫外檢測波長為 250nm ；
[0028]流動相為正己烷:異丙醇=95:5(V/V)；
[0029]柱溫30°C;
[0030]進樣體積為15yL;
[0031]流速0.6ml/min ；
[0032]c)記錄色譜圖。
[0033]本發明所述的分離檢測方法，安塞曲匹出峰位置保留時間(RT)約為10.2min，其對映異構體RT約為8.4min，其非對映異構體的RT約為9.0min和約為11.9min。
[0034]本發明采用以CHIRALPAK AD-H為手性色譜柱，以低級烷烴與低級醇的混合溶液為流動相，可以將安塞曲匹及其異構體進行有效分離，分離度達到1.5以上或2.5以上，完全基線分離，出峰位置穩定，從而可以準確有效控制安塞曲匹及其異構體的質量。采用本發明所述的分離方法，分離檢測安塞曲匹及其異構體的時間在80分鐘以內，在一些實施例中為50分鐘以內，在一些實施例中為30分鐘以內，本發明的方法能簡單、快速、準確的分離檢測出安塞曲匹及其異構體。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0035]圖1示空白溶液的高效液相色譜圖。
[0036]圖2示實施例2安塞曲匹光學異構體系統適用性對照品的高效液相色譜圖。
[0037]圖3示實施例3安塞曲匹供試品的高效液相色譜圖。
[0038]圖4示實施例4安塞曲匹供試品的高效液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0039]為了使本領域的技術人員更好地理解本發明的技術方案，下面進一步披露一些非限制實施例對本發明作進一步的詳細說明。
[0040]本發明所使用的試劑均可以從市場上購得或者可以通過本發明所描述的方法制備而得。
[0041]本發明中，mg表不暈克，ml表不暈升，μ L表不微升。
[0042]實施例1
[0043]儀器與條件
[0044]美國Agilent 1260型高效液相色譜系統及工作站；自動進樣；
[0045]以CHIRALPAK AD-H(4.6x 250mm)為分離柱；紫外檢測波長:250nm ；
[0046]流動相:正己燒:異丙醇=95:5 ;
[0047]柱溫30°C;
[0048]進樣體積為15yL;
[0049]流速0.6ml/min ；
[0050]實驗步驟
[0051 ] 稀釋劑/空白溶劑:正庚烷；
[0052]取安塞曲匹光學異構體系統適用性對照品約25mg，精密稱定至25mL容量瓶，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
[0053]分別取空白溶液和系統適用性溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結果見圖1、圖2。
[0054]—、系統適用性對照品:
[0055]成分:安塞曲匹、對映異構體、非對映異構體1、非對映異構體2 ；
[0056]制備過程描述:往成品API分別添加一定量的對映異構體、非對映異構體1、非對映異構體2。
[0057]二、對映異構體、非對映異構體1、非對映異構體2的定性檢測采取下述方法:
[0058]A空間構型的確定:分別配制一定濃度的對映異構體、非對映異構體1、非對映異構體2溶液，通過核磁共振分析方法對上述樣品進行空間構型的確定。
[0059]B正相分析方法的定位:在核磁共振圖譜上確定空間構型的基礎上，分別配制一定濃度的對映異構體、非對映異構體1、非對映異構體2溶液，用正相色譜分析方法分別進行定位，確定各異構體雜質的出峰位置。最終確定，安塞曲匹出峰位置保留時間(RT)約為10.24min，其對映異構體RT約為8.39min，其非對映異構體的RT約為8.98min和約為11.95min。
[0060]實施例2
[0061]取安塞曲匹供試品約25mg，精密稱定至25mL容量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
[0062]取供試品溶液，按照實例I的條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結果見圖3。
[0063]實施例3
[0064]取不同批次光學異構體含量不同的安塞曲匹供試品約25mg,精密稱定至25mL容量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
[0065]取供試品溶液，照實例I的條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結果見圖4。
[0066]本發明的方法已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在本
【發明內容】
、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明內。
【權利要求】
1.一種分離檢測安塞曲匹及其異構體的方法，其特征在于，用填料為涂覆直鏈淀粉類或鍵合纖維素類的手性色譜柱為分離色譜柱，以低級烷烴和/或醇類溶劑為流動相。
2.如權利要求1所述的方法，所述的手性色譜柱為CHIRALPAKAD-H。
3.如權利要求1所述的方法，所述的低級烷烴為正己烷、環己烷、正戊烷、正庚烷的一種或幾種。
4.如權利要求1所述的方法，所述的醇類溶劑為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇的一種或幾種。
5.如權利要求1所述的方法，所述低級烷烴與醇類溶劑的體積比為100:0至80:20。
6.如權利要求1所述的方法，所述低級烷烴與醇類溶劑的體積比為95:5。
7.如權利要求1所述的方法，所述的流動相為正己烷和異丙醇，其體積比為95:5。
8.如權利要求1所述的方法，安塞曲匹及其異構體的分離檢測包括以下步驟: a)取一定量的安塞曲匹及其異構體混合物，用正庚烷作為稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液； b)取供試品溶液，按如下的條件進行高效液相色譜分析: 色譜柱為 CHIRALPAK AD-H, 檢測器為DAD檢測器，檢測波長230nm-270nm，
流速為 0.3-1.lml/min, 柱溫為20-40°C， 進樣量為2-30 μ L 運行時間為80分鐘以內， 供試液配制:用稀釋劑將供試品配制成0.3-5mg/ml,優選lmg/ml的溶液； c)記錄色譜圖。
9.如權利要求8所述的方法，安塞曲匹及其異構體的分離檢測包括以下步驟: a)取一定量的安塞曲匹及其異構體混合物，用正庚烷作為稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液； b)取供試品溶液，按如下的條件進行高效液相色譜分析: 以CHIRALPAK AD-H (4.6x 250mm)為分離柱；紫外檢測波長為250nm ； 流動相為正己烷:異丙醇=95:5 ； 柱溫30°C ； 進樣體積為15μ L ;
流速 0.6ml/min ； c)記錄色譜圖。
【文檔編號】G01N30/02GK104181252SQ201410441412
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年9月1日 優先權日:2014年9月1日
【發明者】劉瑞娟, 文景兵, 饒萬兵, 劉國柱, 盧凌春, 姚力華 申請人:廣東東陽光藥業有限公司
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